[發明專利]一種全器官細胞增殖定量檢測方法

在審

• 申請號: 202011175487.9
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112326539A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 秦占芬;董夢琦
• 申請（專利權）人: 中國科學院生態環境研究中心
• 主分類號: G01N15/14
• 分類號: G01N15/14;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 周天宇

本發明提供一種全器官細胞增殖定量檢測方法，包括：S1，EdU處理全器官組織，機械破碎組織后孵育細胞；S2，加入多聚甲醛固定細胞狀態；S3，加入熒光染料標記細胞中帶有EdU的細胞；S4，加入DAPI熒光標記全部細胞；S5，將標記后的細胞重懸于PBS溶液中，定量檢測細胞總數量和增殖數量。本發明提供的方法避免了傳統切片檢測方法難以定量分析整體組織細胞增殖的問題，對于定量分析不均質組織的細胞增殖情況十分適用。

技術領域

本發明涉及細胞檢測技術領域，具體涉及一種全器官細胞增殖定量檢測方法。

背景技術

對于傳統的細胞增殖檢測技術，通常采用冰凍切片或石蠟切片的方式獲得目標組織截面，再通過標記該截面上的增殖細胞來分析整體組織的細胞增殖情況。而對于腦質等不均質組織來說，采用組織切片的方法常會出現不同腦截面中增殖細胞比例不一致的情況，影響定性分析。此外，因獲得相對一致的腦組織截面困難，從而難以定量分析該組織的整體細胞增殖情況。

發明內容

(一)要解決的技術問題

針對上述問題，本發明提供了一種全器官細胞增殖定量檢測方法，用于至少部分解決傳統方法難以定量分析組織的整體細胞增殖情況等技術問題。

(二)技術方案

本發明提供了一種全器官細胞增殖定量檢測方法，包括：S1，5-乙炔基-2’脫氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine，EdU)處理全器官組織，機械破碎組織后孵育細胞；S2，加入多聚甲醛固定細胞狀態；S3，加入熒光染料標記細胞中帶有EdU的細胞；S4，加入4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(4′，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)熒光標記全部細胞；S5，將標記后的細胞重懸于磷酸緩沖鹽溶液(Phosphate Buffer Saline，PBS)溶液中，定量檢測細胞總數量和增殖數量。

進一步地，S1中孵育細胞具體包括在含有木瓜蛋白酶的哌嗪-1，4-二乙磺酸溶液中孵育細胞。

進一步地，木瓜蛋白酶的濃度為200～500μg/mL。

進一步地，S2之前還包括：S20，將孵育后的細胞離心，收集解離的細胞。

進一步地，S20中離心加速度為300～400g、溫度范圍為4℃、時長為8-10min。

進一步地，S3中多聚甲醛的濃度為4％。

進一步地，S2、S3、S4每一操作之后離心洗滌細胞，離心洗滌的離心加速度為300～400g、溫度范圍為4℃、時長為8～10min。

進一步地，全器官細胞包括爪蛙、斑馬魚、小鼠的全腦細胞。

進一步地，定量檢測的方法包括單細胞懸液使用流式細胞儀檢測、將單細胞懸液涂至載玻片上制成玻片樣品在熒光顯微鏡下檢測。

進一步地，S5中將細胞重懸于PBS溶液后還包括將其置于4℃避光條件下保存備檢。

(三)有益效果

本發明實施例提供的一種全器官細胞增殖定量檢測方法，可以定量分析不均質組織的整體細胞增殖情況。

附圖說明

圖1示意性示出了根據本發明實施例一種全器官細胞增殖定量檢測方法的流程圖；

圖2示意性示出了根據本發明實施例非洲爪蛙蝌蚪全腦解離后DAPI染色圖片；

圖3示意性示出了根據本發明實施例非洲爪蛙蝌蚪全腦解離后EdU染色圖片；

圖4示意性示出了根據本發明實施例非洲爪蛙蝌蚪全腦解離后DAPI染色圖片和EdU染色圖片的疊加。

具體實施方式