[發明專利]一種檢測新型冠狀病毒N蛋白的適配體膠體金試紙及其制備方法

在審

• 申請號: 202011172270.2
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112198316A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 章文羿;劉行波;程煥義;黃清瑞;郭嬌嬌;邵云鵬;陳欣甜;劉佳琪
• 申請（專利權）人: 北京安必奇生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/52;C12N15/115
• 代理公司: 北京名華博信知識產權代理有限公司 11453
• 代理人: 韓閃閃

本發明公開了一種檢測新型冠狀病毒N蛋白的適配體膠體金試紙及其制備方法，適配體膠體金試紙包括：依次相互搭接的樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；結合物墊上包被有膠體金標記的適配體探針；從樣品墊到吸收墊的方向上，硝酸纖維素膜上依次設置有檢測線和質控線，檢測線包被有新型冠狀病毒N蛋白單抗；質控線包被有鏈霉親和素蛋白多抗。本申請的檢測新型冠狀病毒N蛋白的適配體膠體金試紙選用適配體和抗體結合檢測新型冠狀病毒的N蛋白，親和力更高，反應速度更快，便于操作，易于質控和保存。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，尤其涉及一種用于檢測新型冠狀病毒N 蛋白的適配體膠體金試紙及其制備方法。

背景技術

冠狀病毒是一個大型病毒家族，已知可引起感冒以及中東呼吸綜合征 (MERS)和嚴重急性呼吸綜合征(SARS)等較嚴重疾病。新型冠狀病毒是以前從未在人體中發現的冠狀病毒新毒株。針對新型冠狀病毒的疫苗及特異性治療藥物還沒有研發成功，早期的預防和診斷是防控疫情的重要手段。

目前，用于檢測新型冠狀病毒的試紙采用的是抗體對檢測，這個試紙的弊端在于，尋找可匹配檢測的抗議對的難度較大，而且用于檢測對的抗體對的親和力可能存在較大差異，生產成本較高。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種檢測新型冠狀病毒N蛋白的適配體膠體金試紙及其制備方法，適配體膠體金試紙用于檢測新型冠狀病毒的核殼蛋白基因(nucleocapsid protein，N)，以下簡稱N蛋白。

根據本申請的一個方面，提供了一種檢測新型冠狀病毒N蛋白的適配體膠體金試紙，適配體膠體金試紙包括：依次相互搭接的樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；結合物墊上包被有膠體金標記的適配體探針；從樣品墊到吸收墊的方向上，硝酸纖維素膜上依次設置有檢測線和質控線，檢測線包被有新型冠狀病毒N蛋白單抗；質控線包被有鏈霉親和素蛋白多抗。

可選擇地，適配體探針包括核酸適配體48、核酸適配體58、核酸適配體 88中的一種或兩種以上；核酸適配體48的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；核酸適配體58的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示；核酸適配體88的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。

可選擇地，適配體探針為生物素化的核酸適配體與鏈霉親和素結合，共同形成的鏈霉親和素-生物素-核酸適配體結構。

可選擇地，核酸適配體包括核酸適配體48、核酸適配體58和核酸適配體 88；核酸適配體48、核酸適配體58、核酸適配體88的比例為1:1:1。

可選擇地，結合物墊上包被的膠體金標記的適配體探針的工作濃度為 1-10pmol/ml；檢測線包被的新型冠狀病毒N蛋白單抗的工作濃度為 1～2mg/ml；質控線包被的鏈霉親和素蛋白多抗的工作濃度為1～2mg/ml。

可選擇地，新型冠狀病毒N蛋白單抗檢測的新型冠狀病毒N蛋白的序列如SEQIDNO：4所示。

根據本申請的另一個方面，提供了一種檢測新型冠狀病毒N蛋白的適配體膠體金試紙的制備方法，包括以下步驟：(1)將生物素化的核酸適配體與膠體金標記的鏈霉親和素結合，得到鏈霉親和素-生物素-核酸適配體；(2) 將鏈霉親和素-生物素-核酸適配體噴涂到結合物墊上；(3)將新型冠狀病毒 N蛋白單抗在硝酸纖維素膜上劃線；將鏈霉親和素蛋白多抗在硝酸纖維素膜上劃線；得到包被了檢測線和質控線的硝酸纖維素膜；(4)將樣品墊結合物墊、硝酸纖維素膜和吸收墊依次固定在底板上，得到用于檢測新型冠狀病毒 N蛋白的適配體膠體金試紙。