[發(fā)明專利]一種快速提高脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體產(chǎn)量的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011162504.5
• 申請日: 2020-10-27
• 公開（公告）號: CN112553152A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李棟;董靜;戴曉宇;劉抗;趙莎莎;張?zhí)煊?/a>
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶市鉑而斐細(xì)胞生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N13/00
• 代理公司: 重慶上義眾和專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50225
• 代理人: 譚勇

本發(fā)明公開了一種快速提高脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體產(chǎn)量的方法，其關(guān)鍵在于：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)電磁輻射或/和利用激光輻射處理，連續(xù)至少7天，每天1次，每次20～40min，并在37℃、5％CO₂濃度、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；所述電磁輻射時采用預(yù)活化液保護(hù)處理；所述激光輻射處理后采用糖膜蛋白修復(fù)液修復(fù)處理。本發(fā)明一種快速提高脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體產(chǎn)量的方法，該方法提高外泌體產(chǎn)量的關(guān)鍵因素為輻射及輻射條件的控制，通過輻射，可有效將外泌體保留在細(xì)胞中，待7天后富集外泌體，進(jìn)而提高了外泌體的含量；同時使用預(yù)活化液和糖膜蛋白修復(fù)液對細(xì)胞進(jìn)行保護(hù)，預(yù)防和修復(fù)輻射的傷害；同時能夠保證外泌體保持原有的作用效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體的說，涉及一種快速提高脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體產(chǎn)量的方法。

背景技術(shù)

外泌體是一種直徑在40-100nm的脂質(zhì)雙分子層囊泡，最早在1983年研究羊的網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟過程中分泌的囊泡而提出，其可攜帶細(xì)胞特異表達(dá)的蛋白、脂質(zhì)和核酸等物質(zhì)，然后通過與細(xì)胞的接觸直接將所攜帶的物質(zhì)傳遞給鄰近或者遠(yuǎn)距離的細(xì)胞。目前大量研究表明，間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體可通過其內(nèi)容的蛋白、RNA成分胞間轉(zhuǎn)移，發(fā)揮與間充質(zhì)干細(xì)胞相類似的組織修復(fù)、免疫抑制、調(diào)節(jié)免疫功能等作用。并且與細(xì)胞治療相比較，外泌體性質(zhì)更穩(wěn)定，保存運輸方便，沒有移植細(xì)胞帶來的免疫排斥反應(yīng)和腫瘤形成風(fēng)險，因此有望成為一種新的治療策略。

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞作為重要的種子細(xì)胞之一，來源充足，可通過較簡單的方法大量提取，具有廣闊的研究和應(yīng)用前景。而脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞儲存條件苛刻，運輸不便，移植至生物體內(nèi)存活率較低，臨床應(yīng)用有一定困難。外泌體具有分泌細(xì)胞的特性，儲存簡單，能在4℃條件下保存較長時間，運輸方便，免疫原性較脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞更低，為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在臨床的應(yīng)用提供了方向。但是干細(xì)胞的量非常少，并且隨著個體年齡的增加，干細(xì)胞的數(shù)量逐漸減少、分泌活性逐漸降低，導(dǎo)致外泌體的總產(chǎn)量進(jìn)一步減少，很難滿足自體修復(fù)和臨床治療的需求，這限制了它的進(jìn)一步的應(yīng)用。因此對于干細(xì)胞外泌體的實際應(yīng)用而言，需要通過擴(kuò)增得到足夠的細(xì)胞數(shù)目，并刺激單細(xì)胞分泌更多的外泌體。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的目的在于提供一種快速提高脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體產(chǎn)量的方法。

本發(fā)明目的是這樣實現(xiàn)的：

一種快速提高脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體產(chǎn)量的方法，其關(guān)鍵在于：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)電磁輻射或/和利用激光輻射處理，連續(xù)至少7，每天1次，每次20～40min，并在37℃、5％CO₂濃度、飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；所述電磁輻射時采用預(yù)活化液保護(hù)處理；所述激光輻射處理后采用糖膜蛋白修復(fù)液修復(fù)處理。

優(yōu)選地，上述電磁輻射的頻率為30～70Hz、強(qiáng)度為1～5mt。進(jìn)一步優(yōu)選，所述電磁輻射的頻率為50Hz、強(qiáng)度為3mt。

優(yōu)選地，上述激光輻射的輻射能量為1～5j/cm²、波長為500～1000nm、功率輸出為100～400mw、功率密度為0.1～0.4w/cm²。進(jìn)一步優(yōu)選，所述激光輻射的輻射能量為5j/cm²、波長為800nm、功率輸出為200mw、功率密度為0.2w/cm²。

優(yōu)選地，上述預(yù)活化液的添加量為1～5ng/mL。

優(yōu)選地，上述預(yù)活化液由以下重量分?jǐn)?shù)的組份組成：0.2-0.8％層粘連蛋白、0.1-0.5％膠原蛋白、0.2-0.6％纖連蛋白、余量為溶劑。

優(yōu)選地，上述糖膜蛋白修復(fù)液的添加量1uL/mL。

優(yōu)選地，上述糖膜蛋白修復(fù)液由以下重量分?jǐn)?shù)的組份組成：0.1-0.4％卵磷脂、0.05-0.12％唾液酸、0.01-0.06％多種氨基酸、0.8-1.6％葡萄糖、余量為溶劑。