[發明專利]一種雙水相萃取純化核酸酶P1的方法有效
| 申請號： | 202011158223.2 | 申請日： | 2020-10-26 |
| 公開（公告）號： | CN112175920B | 公開（公告）日： | 2022-08-30 |
| 發明（設計）人： | 陳曉春;張磊;湯亦文;李梓陽 | 申請（專利權）人： | 南京工業大學;南京同凱兆業生物技術有限責任公司 |
| 主分類號： | C12N9/22 | 分類號： | C12N9/22 |
| 代理公司： | 江蘇圣典律師事務所 32237 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 211816 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 雙水相 萃取 純化 核酸酶 p1 方法 | ||
1.一種雙水相萃取純化核酸酶P1的方法，其特征在于，用含有聚乙二醇和核苷酸二鈉鹽水溶液的雙水相混合液從含有核酸酶P1的粗酶液中萃取純化核酸酶P1；
其中，所述的聚乙二醇分子量為2000～3000；
所述的雙水相混合液中，聚乙二醇、核苷酸二鈉鹽和水的質量百分比為28:32:40。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的核苷酸二鈉為鳥苷酸二鈉、腺苷酸二鈉、肌苷酸二鈉、尿苷酸二鈉和胞苷酸二鈉中的任意一種或幾種組合。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含有核酸酶P1的粗酶液為桔青霉發酵所制得的；其中，所述的桔青霉(Penicillium citrinum)已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.2014。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的含有核酸酶P1的粗酶液中核酸酶P1的酶活為4000～6000U/mL。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的雙水相混合液與含有核酸酶P1的粗酶液的質量比為0.5～1:1。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將雙水相與含有核酸酶P1的粗酶液混合后，調節pH為5.0～8.0，靜置，收集上層液相；將上層液相稀釋后，用超濾膜超濾，所得截留物即為純化的核酸酶P1。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的靜置為室溫靜置10min。
8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的超濾膜為聚醚砜膜，分子量為10～30KDa。
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