[發(fā)明專利]一種飼料中喹諾酮類藥物的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011156882.2
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112362797B
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發(fā)明（設計）人: 汪行舟;代兵;李華;何艷;呂凱凱
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江國正檢測技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06;G01N30/72;B01J20/281;B01J20/26
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏

1.一種飼料中喹諾酮類藥物的檢測方法，其特征是，包括如下步驟：

（1）建立待測喹諾酮類藥物的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫和質(zhì)譜譜庫：配置待測喹諾酮類藥物的標準溶液，采用超高壓液相色譜-四級桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀確定待測喹諾酮類藥物的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫和質(zhì)譜譜庫；

（2）樣品前處理：將飼料用甲酸乙腈溶液提取，提取液經(jīng)分子印跡整體柱固相萃取并洗脫后得到前處理后的樣品；

（3）樣品檢測：采用超高壓液相色譜-四級桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀對前處理后的樣品進行檢測；

（4）結(jié)果分析：將樣品檢測結(jié)果與建立的精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫和質(zhì)譜譜庫進行對比分析，當檢測結(jié)果與精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫和質(zhì)譜譜庫信息匹配時，則確定樣品中檢測出待測喹諾酮類藥物；

步驟（2）中分子印跡整體柱的制備方法為：

A）將4,6,8-三甲基-1H-喹啉-2-酮、5,7-二氯-4-羥基喹啉-3-羧酸、(CH₃COO)₂Zn·6H₂O、甲基丙烯酸、4-乙烯吡啶、三甲基丙烯酸三羥甲基丙烷酯、二甲基甲酰胺、二甲亞砜及1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽混合，超聲溶解5~10min；再加入偶氮二異丁腈，超聲振蕩10~20min，充氮氣5~10min；其中，4,6,8-三甲基-1H-喹啉-2-酮、5,7-二氯-4-羥基喹啉-3-羧酸、(CH₃COO)₂Zn·6H₂O、甲基丙烯酸、4-乙烯吡啶、三甲基丙烯酸三羥甲基丙烷酯、二甲基甲酰胺、二甲亞砜、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽及偶氮二異丁腈的混合比例為：1mmol：（1~2mmol）:（1~2mmol）：（3~6mmol）：（3~6mmol）：（25~35mmol）：（2~3mL）：（10~15mL）：（20~25mL）：（0.4~0.6g）；

B）將反應后的溶液注入下端封口的不銹鋼柱，密封后50~60℃恒溫聚合反應18~24h；

C）將反應后的柱子以0.1~1.0mL/min的流速，先用乙腈沖洗5~10min；再用甲醇和乙酸的混合溶液沖洗10~15min，最后用甲醇沖洗3~5min，得到所述分子印跡整體柱。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種飼料中喹諾酮類藥物的檢測方法，其特征是，所述喹諾酮類藥物包括氧氟沙星、諾氟沙星、二氟沙星、氟羅沙星、奧比沙星、丹諾沙星、恩諾沙星、沙拉沙星、環(huán)丙沙星、培氟沙星、依諾沙星、司帕沙星、洛美沙星。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種飼料中喹諾酮類藥物的檢測方法，其特征是，步驟（1）中所述精確質(zhì)量數(shù)據(jù)庫包括各待測喹諾酮類藥物的色譜保留時間及一個前體離子和對待測喹諾酮類藥物分別施加不同的碰撞能量后響應強度最高的兩個特征碎片離子的精確質(zhì)量數(shù)；質(zhì)譜譜庫包括對待測化合物分別施加不同碰撞能量后產(chǎn)生的二級質(zhì)譜圖。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種飼料中喹諾酮類藥物的檢測方法，其特征是，步驟（1）和（4）中超高壓液相色譜-四級桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀的色譜條件為：色譜柱：C₁₈色譜柱；柱溫：29.5~30.5℃；進樣量：10μL；流速：0.3~0.35mL/min；流動相：A為0.10~0.15wt%的甲酸水溶液，B為0.10~0.15wt%的甲酸乙腈溶液，洗脫梯度：1~8min，5~95vol%B；8~10min，95vol%B；10~10.01min，95~5vol%B；10.01~13.50min，5vol%B。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的一種飼料中喹諾酮類藥物的檢測方法，其特征是，步驟（1）和（4）中超高壓液相色譜-四級桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀的質(zhì)譜條件為：毛細管電壓為3.4~3.6 kV；離子傳輸管溫度為315~325℃；鞘氣壓力為38~42arb，輔助氣壓力8~12arb；掃描模式為全掃描/二級離子掃描，掃描范圍為m/z 100～1000；一級質(zhì)譜分辨率為70000FWHM，二級質(zhì)譜分辨率為17500 FWHM；軌道阱最大容量為1×10⁶，最大注入時間為100ms；碰撞裂解氣為高純氮氣，歸一化碰撞能量為17.5 eV、35.0 eV、52.5 eV。