[發明專利]一種用于人體維生素B12含量檢測的釋放劑及其應用

有效

• 申請號: 202011156000.2
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112485418B
• 公開（公告）日: 2023-04-11
• 發明（設計）人: 仝艷艷;王鵬
• 申請（專利權）人: 北京利德曼生化股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 天津翰林知識產權代理事務所(普通合伙) 12210
• 代理人: 付長杰

本發明為一種用于人體維生素B12含量檢測的釋放劑及其應用，包括變性劑R1和中和劑R3；變性劑R1為Tris?Hcl體系強堿溶液，中和劑R3為Tris?Hcl體系的無水乙醇、三(2?羧乙基)膦溶液。本發明提供的維生素B12釋放劑通過變性劑R1強堿溶液從結合蛋白中解離維生素B12，然后在中和劑R3的作用下實現磁微粒化學發光檢測，B12釋放劑與對應的檢測試劑及檢測方法，可有效、完全的釋放樣本中的維生素B12，檢測結果靈敏度高，能夠檢測到低濃度維生素B12，重復性好，性能能達到國際產品的水平。并且對樣品的前處理要求低、可快速高通量檢測大批量樣本，便于臨床應用。

技術領域

本發明涉及醫用體外免疫診斷試劑領域，具體是一種用于血清或肝素血漿中維生素B12含量檢測的釋放劑的制備，應用于一種采用磁微粒化學發光技術和抗原-抗體結合技術檢測人體維生素B12含量的磁微粒化學發光檢測試劑。

背景技術

維生素B12，又名氰鈷胺素，是一種一個鈷原子周圍的有四個吡咯環的類咕啉化合物，分子量為1355。鈷胺素主要來源于動物產品，如肉、蛋、牛奶和其他乳制品。人體吸收維生素B12需要借助一種胃腸道分泌物(內因子)，維生素B12和這種蛋白質附著在回腸黏膜上的受體形成一種復合體，在回腸粘膜上一種被稱為運鈷胺素的蛋白質將維生素B12從黏膜細胞中轉移到血液和組織中。除儲存在骨髓以及其他組織外，大多數維生素B12被儲存在肝臟。如果需要，它們就會由B12結合蛋白質(轉鈷胺)承載并釋放到血漿中去。

維生素B12在體內以輔酶的形式存在，可以增加葉酸的利用率，促進碳水化合物、脂肪和蛋白質的代謝；其和葉酸一樣都是正常DNA(脫氧核糖核酸)合成中所不可或缺的，具有活化氨基酸的作用和促進核酸的生物合成，可促進蛋白質的合成，它對嬰幼兒的生長發育有重要作用；促進紅細胞的發育和成熟，使肌體造血機能處于正常狀態，預防惡性貧血，維護神經系統健康；參與新陳代謝，是神經系統功能健全不可缺少的維生素，并參與神經組織中一種脂蛋白的形成。

Vitamin?B12和葉酸是通過蛋氨酸合成的反應路徑連接的，所以兩者中任何一樣缺乏都會擾亂代謝途徑，導致同樣的癥狀和醫學問題。在臨床上維生素B12常與葉酸、同型半胱氨酸、鐵蛋白等聯合檢測，用于對糖尿病、貧血癥等進行臨床分析。大量的研究表明維生素B12貧乏也是巨幼紅細胞性貧血癥的誘因，同時也與老年癡呆癥、抑郁癥以及冠心病等有關。維生素B12缺乏也是懷孕早期流產、反復性流產的危險因素之一。人體缺乏維生素B12時易造成神經系統不可逆損害，引起煩躁不安、記憶衰退等癥狀。過量的攝入可能會出現哮喘、蕁麻疹、濕疹、面部浮腫、寒顫等過敏反應，也可能引發神經興奮、心前區痛和心悸；也有報道認為過量可能會促進腫瘤發生。因此臨床上建議對該類維生素做到先檢測再補充，不缺乏不補充。

目前，定量測定VB12的方法，有微生物學法，高效液相色譜法(HPLC)，酶聯免疫吸附法(ELISA)、化學發光免疫分析法(CLIA)以及放射免疫法(RIA)。維生素B12在體內是與蛋白結合而存在的，所以在檢測血清或血漿等生物樣本時，需要對樣本進行前處理，使其將維生素B12由結合蛋白上釋放出來，再進行檢測。現有問題是對樣本進行前處理時解離不徹底，導致檢測結果不準確，且不能夠檢測到低濃度維生素B12水平，重復性較差，無法形成統一標準。

發明內容

本發明旨在闡述一種高效、簡單、快速的用于人血清或肝素血漿中維生素B12含量檢測的釋放劑，并應用于相應的免疫檢測方法中，以解決現有產品釋放不完全、重復性差的技術問題。

基于上述目的，本發明提供一種用于人血清或肝素血漿中維生素B12含量檢測的釋放劑，包括變性劑R1和中和劑R3；變性劑R1為Tris-Hcl體系強堿溶液，中和劑R3為Tris-Hcl體系的無水乙醇、三(2-羧乙基)膦溶液。

所述變性劑R1的pH值為12.0～13.0，包括：Tris-Hcl，濃度為7.5～8.2g/L；氫氧化鈉，濃度為20.0-22.0g/L。