[發明專利]與小麥低多酚氧化酶活性基因QPpo-5D共分離的分子標記

有效

• 申請號: 202011155159.2
• 申請日: 2020-10-26
• 公開（公告）號: CN112048569B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 蔡瑾;吳紀中;付必勝;劉彩云;張巧鳳;郭煒;吳小有
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/04
• 代理公司: 北京中濟緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 祝亞京

1.AX-110939270標記的KASP引物在如下任意一項中的應用：

（1）在鑒定或輔助鑒定小麥低多酚氧化酶活性中的應用；

（2）在選育具有低多酚氧化酶活性的小麥中的應用；

所述KASP引物的序列如下：

前引物1：FAM 5’- CTCGTGAATTAGTAAACGACTATTTC -3’；

前引物2：HEX 5’- CTCGTGAATTAGTAAACGACTATTTG -3’；

后引物：5’- TGAAAGCAGATGCATCTGCCTTCTGGCTC -3’；

選擇AX-110939270標記的熒光信號為HEX的品種；所述小麥為長江中下游麥區小麥。

2.一種低多酚氧化酶活性小麥的育種方法，其特征在于，采用權利要求1所述的KASP引物PCR擴增小麥葉片DNA，選擇AX-110939270標記的熒光信號為HEX的品種；所述小麥為長江中下游麥區小麥。

3.根據權利要求2所述低多酚氧化酶活性小麥的育種方法，其特征在于，將所得擴增產物進行熒光信號掃描，采用Kluster Caller軟件對掃描數據進行分析得到散點圖，散點圖中，X軸區域對應的熒光信號為FAM，Y軸區域對應的熒光信號為HEX，若擴增產物的熒光信號為FAM，表明所述小麥為CC基因型品種；若擴增產物的熒光信號為HEX，表明所述小麥為GG基因型品種。

4.根據權利要求3所述低多酚氧化酶活性小麥的育種方法，其特征在于，PCR擴增的反應體系為：

20ng/μl 的2.5 μl模板、0.07 μl KASP assay mix、2×KASP master mix 2.5 μl；所述KASP assay mix包括：每個等位基因特異性前引物各12 μl 100 μM，30 μl后引物100 μM與46 μl Tris-HCl 10 mM，pH 8.3。

5.根據權利要求2所述低多酚氧化酶活性小麥的育種方法，其特征在于，PCR反應循環程序如下：94℃預變性15 min，然后按“94℃，20s；65-57℃，60s；每個循環下降0.8℃”進行10個循環；最后按照“94℃，20s；57℃，60s”進行32個循環擴增。