[發(fā)明專利]一種用于臨床檢測(cè)新冠肺炎患者血漿中活性尿激酶受體的試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011147152.6
• 申請(qǐng)日: 2020-10-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112180103A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃明東;江龍光;袁彩;李林林;王蕊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州大學(xué);福州國(guó)重生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學(xué)俊

1.一種用于臨床檢測(cè)新冠肺炎患者血漿中活性尿激酶受體的試劑盒，其特征在于，包括以下組分：uPAR標(biāo)準(zhǔn)品、酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)高結(jié)合力酶標(biāo)板、兔源抗活性suPAR多克隆抗體、堿性磷酸酶標(biāo)記的羊抗兔IgG、洗滌液、樣品稀釋液、底物顯色液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于臨床檢測(cè)新冠肺炎患者血漿中活性尿激酶受體的試劑盒，其特征在于，所述酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)高結(jié)合力酶標(biāo)板預(yù)先包被40-140 μg/ml的可結(jié)合活性suPAR的融合蛋白；所述包被具體包括如下步驟：

向酶標(biāo)板中加入經(jīng)過(guò)包被液稀釋的ATF或ATF-HSA蛋白溶液，用密封膠帶將96孔板密封好以防止液體蒸發(fā)，并與4℃過(guò)夜；揭開(kāi)密封膠帶，甩干酶標(biāo)儀板孔內(nèi)的液體，并用排槍吸取洗滌液，洗滌每孔3次，在最后一次洗滌后，將酶標(biāo)板在吸水紙上輕輕拍干并保證孔內(nèi)沒(méi)有氣泡存留；向所有孔中加入封閉液，并用密封膠帶將96孔板密封好以防止液體蒸發(fā)，置于37℃孵育1h。

3.揭開(kāi)密封膠帶，甩干酶標(biāo)儀板孔內(nèi)的液體，并用排槍吸取洗滌液，洗滌每孔3次，在最后一次洗滌后，將酶標(biāo)板在吸水紙上輕輕拍干并保證孔內(nèi)沒(méi)有氣泡存留；隨后將板至于4℃存放；

所述封閉液配方為：由TBST，pH 7.4的緩沖溶液配制而成，其中含有4%的蔗糖和3%的BSA。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于臨床檢測(cè)新冠肺炎患者血漿中活性尿激酶受體的試劑盒，其特征在于，所述ATF或ATF-HSA中ATF的的氨基酸序列為：

SNELHQVPSNCDCLNGGTCVSNKYFSNIHWCNCPKKFGGQHCEIDKSKTCYEGNGHFYRGKASTDTMGRPCLPWNSATVLQQTYHAHRSDALQLGLGKHNYCRNPDNRRRPWCYVQVGLKPLVQECMVHDCADGKKPSSPPEE。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于臨床檢測(cè)新冠肺炎患者血漿中活性尿激酶受體的試劑盒，其特征在于，所述包被液為pH 9.6的50 mM的碳酸氫鹽緩沖液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于臨床檢測(cè)新冠肺炎患者血漿中活性尿激酶受體的試劑盒，其特征在于，所述洗滌液和樣品稀釋液的配方為：含0.05% Tween 20的TBS緩沖液，其中TBS的配方為20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，2.7 mM KCl。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于臨床檢測(cè)新冠肺炎患者血漿中活性尿激酶受體的試劑盒，其特征在于，所述底物顯色液為0.1 M Tris-HCl，0.1 M NaCl，5 mM MgCl和1 mg/mlPNPP。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于臨床檢測(cè)新冠肺炎患者血漿中活性尿激酶受體的試劑盒，其特征在于，所述uPAR標(biāo)準(zhǔn)品制備方法為：在果蠅胚胎細(xì)胞S2中表達(dá)重組的suPAR，經(jīng)離子柱純化得到。