[發(fā)明專(zhuān)利]鹽芥鹽誘導(dǎo)表達(dá)基因TsHKT1;2啟動(dòng)子的克隆與應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011138797.3
• 申請(qǐng)日: 2020-10-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112251447A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 左開(kāi)井;姚丹;熊雅麗;呂萌荔;李建福
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/29
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/29;C12N15/113;C12N15/84;A01H5/00;A01H6/20;C12Q1/6895
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種鹽芥鹽誘導(dǎo)表達(dá)基因TsHKT1；2，其特征在于，所述基因核苷酸序列如SEQ.ID.NO:1所示。

2.一種鹽芥鹽誘導(dǎo)表達(dá)基因TsHKT1；2啟動(dòng)子，其特征在于，所述啟動(dòng)子核苷酸序列如SEQ.ID.NO:2所示。

3.一種含有如權(quán)利要求2所述TsHKT1；2啟動(dòng)子的重組表達(dá)載體。

4.如權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體為在植物GUS表達(dá)載體pCambia1305.1的酶切位點(diǎn)插入所述TsHKT1；2啟動(dòng)子得到的重組質(zhì)粒；在所述重組表達(dá)質(zhì)粒中，TsHKT1；2啟動(dòng)子連接在GUS基因的上游。

5.如權(quán)利要求4所述的重組表達(dá)載體，其特征在于，所述酶切位點(diǎn)為BamHⅠ和BglⅡ。

6.如權(quán)利要求4或5所述的重組表達(dá)載體，其特征在于，所述插入采用的擴(kuò)增引物為：

FP2:TTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCGCGTTTGTCAAACTCGATTGG

RP2:AAATTTACCCTCAGATCTGGAGAGATTTAGCATGTTGCGA。

7.一種如權(quán)利要求2所述的TsHKT1；2啟動(dòng)子作為鹽芥鹽誘導(dǎo)上調(diào)啟動(dòng)子在植物基因改造工程中驅(qū)動(dòng)目的基因表達(dá)的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，將含有所述TsHKT1；2啟動(dòng)子的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)GV3101，利用花序侵染法進(jìn)行植物的遺傳轉(zhuǎn)化；所收種子經(jīng)多代潮霉素篩選，獲得純系轉(zhuǎn)基因植株。

9.一種如權(quán)利要求3所述的重組表達(dá)載體在植物抗鹽機(jī)制中的應(yīng)用。

10.一種如權(quán)利要求1所述的鹽芥鹽誘導(dǎo)表達(dá)基因TsHKT1；2在鹽芥中的表達(dá)分析方法，其特征在于：

A.所述鹽芥為：(1)萌發(fā)后4-10天的鹽芥，經(jīng)150-300mM NaCl處理2-30h；或(2)低溫春化后正常光照培養(yǎng)10-20天的鹽芥，經(jīng)20-40天的150-300mM NaCl處理；

B.設(shè)計(jì)對(duì)所述TsHKT1；2基因的相對(duì)熒光定量PCR的引物如下：

上游引物：CTCTACTTCTCTCATTTCATTAACTTCAA

下游引物：GATCTGACTAGAAAGCTTGACATGATT；

C.以步驟A所得鹽芥各組織RNA為模板進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，分析TsHKT1；2基因在鹽芥各組織中的表達(dá)。