[發明專利]一種產氣莢膜梭菌菌劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202011132454.6
• 申請日: 2020-10-21
• 公開（公告）號: CN112300960B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發明（設計）人: 高麗娟;劉悅;任敏;馬凱;鄧婕;左嘉;袁立艷
• 申請（專利權）人: 北京市理化分析測試中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/145
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 劉依云;劉亭亭

本發明涉及食品或環境質控領域領域，公開了一種產氣莢膜梭菌菌劑及其制備方法和應用，該產氣莢膜梭菌菌劑含有產氣莢膜梭菌和保護劑，所述保護劑含有脫脂奶粉、非還原性二糖、谷氨酸鹽和抗壞血酸鹽；其中，所述脫脂奶粉、非還原性二糖、谷氨酸鹽和抗壞血酸鹽的重量比為10?30：10?30：1?5：1。采用本發明的方法能夠進一步提高產氣莢膜梭菌菌劑的均勻性、運輸穩定性和儲藏穩定性，可滿足質控樣品使用要求，可用于實驗室能力驗證考核。

技術領域

本發明涉及食品或環境質控領域，具體涉及一種產氣莢膜梭菌菌劑及其制備方法和應用。

背景技術

產氣莢膜梭菌(Clostridium perfringens)，又稱魏氏梭菌(clostridiumwelchii)屬于革蘭陽性產芽抱桿菌科，梭菌屬。菌體呈直桿狀，兩端鈍圓，大小為0.6-2.4μm×1.3-19.0μm常單在或成雙排列，沒有鞭毛，不運動。可產生芽抱，芽胞位于菌體的兩端，也有時位于中央，形態大而卵圓，但在一般條件下很難形成，所以不易被發現。多數菌株可以形成莢膜，組成莢膜的多糖成份因菌株型的不同而有所差異工。

產氣莢膜梭菌在自然界分布廣泛，普遍存在于水、土壤以及動物腸道中。此菌屬于厭氧菌，但對厭氧要求不嚴格。此菌在液體培養基中大量產生CO₂和H₂，創造厭氧環境，促進自身的增殖。該菌產生的毒素一旦出現在腸道內，就會與腸上皮細胞的受體結合，進入到細胞膜內，毒素隨后改變細胞膜的滲透性，導致腸胃炎，主要癥狀包括腹瀉腹痛，也可能出現惡心、嘔吐、發燒等癥狀；但對幼兒、老人和病患可能致命。

產氣莢膜梭菌是一種常見的條件致病菌，芽孢和營養細胞存在于土壤，灰塵，動物和人類腸道內容物。許多食品，尤其生食、生水易受到這些來源的污染。飲水質量直接關系人類健康和生命安全，準確并及時地檢測水中是否含有產氣莢膜梭菌非常重要。2009年4月1日實施的“飲用天然礦泉水檢測方法”國標中增加了對產氣莢膜梭菌指標的檢測方法；GB/T 5749生活飲用水衛生標準中也涉及到產氣莢膜梭菌的檢測指標，其中產氣莢膜梭狀芽胞桿菌在生活飲用水水質參考指標及限制為0CFU/100mL。

為了提高在食品或環境質控中的檢測結果的準確性，在檢測過程中需要采用均勻性好、運輸穩定性和儲藏穩定性高的產氣莢膜梭菌菌劑(質控樣品)做陽性對照試驗，而目前市售的可用作質控樣品的產氣莢膜梭菌菌劑較少，其均勻性、運輸穩定性和儲藏穩定性均有待提高。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術存在的產氣莢膜梭菌菌劑均勻性較差，運輸穩定性和儲藏穩定性較低的問題，提供一種產氣莢膜梭菌菌劑及其制備方法和應用，本發明的產氣莢膜梭菌菌劑具有均勻性好，運輸穩定性和儲藏穩定性高的優勢，能夠滿足質控樣品使用要求，可用于實驗室能力驗證考核。

為了實現上述目的，本發明一方面提供一種產氣莢膜梭菌菌劑，該產氣莢膜梭菌菌劑含有產氣莢膜梭菌和保護劑，所述保護劑含有脫脂奶粉、非還原性二糖、谷氨酸鹽和抗壞血酸鹽；

其中，所述脫脂奶粉、非還原性二糖、谷氨酸鹽和抗壞血酸鹽的重量比為10-30：10-30：1-5：1。

本發明第二方面提供一種制備第一方面所述產氣莢膜梭菌菌劑的方法，該方法包括以下步驟：

1)將產氣莢膜梭菌、水和保護劑混合均勻后進行預冷凍，得到預冷凍凝結物；

2)將所述預冷凍凝結物進行真空冷凍干燥。

本發明第三方面提供第一方面所述的產氣莢膜梭菌菌劑或第二方面所述的方法在食品或環境質控中的應用。