[發明專利]阻斷鐵皮石斛組培苗被細菌污染的方法

在審

• 申請號: 202011112089.2
• 申請日: 2020-10-16
• 公開（公告）號: CN112237140A
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發明（設計）人: 李涵;曹樺;陸琳;姬語璐;李紳崇;張顥
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所;玉溪澄花生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊;蔣文睿

本發明提供一種阻斷鐵皮石斛組培苗被細菌污染的方法，其特征在于包括以下步驟：1）納米銅母液制備，2）納米銅母液稀釋，3）消毒液配制，4）混合培養基Ⅰ制備，5）鐵皮石斛種子消毒，6）鐵皮石斛種子培養，7）鐵皮石斛種子分化培養，8）混合培養基Ⅱ制備，9）分化幼胚培養，10）瓶苗培養、移栽。將10^?2%的納米銅溶液加入到培養基中，在種子萌發及幼胚分化兩個培養過程中，對侵染細菌進行阻斷，有效降低了鐵皮石斛的細菌污染率，具有獨特的技術效果，阻斷率高達93%。能夠減少抗生素對植物的傷害，提高鐵皮石斛種苗的成活率，即使存在污染，亦能阻斷，從而保存下大量的實驗材料。

技術領域

本發明涉及新材料及植物組織培養領域，特別是涉及到利用納米銅阻斷鐵皮石斛組培苗細菌污染的方法。

背景技術

利用先進的物理、化學、生物等技術制成的，具有一維、二維或三維且尺度只有幾納米或幾十納米的納米材料，其結構與普通材料有很大的不同，如納米晶界的原子間距大、密度低、原子排列具有隨機性等。近年來，有關利用納米銅來抗菌的相關研究也逐漸引起關注。納米銅因其量子效應、小尺寸效應、表面積大等特點，展現較好的安全性、抗菌性及抗菌長效性。

鐵皮石斛果莢開裂后暴露的種子經過無菌處理后，仍然容易造成細菌污染。

因此，有必要研究新的能阻斷鐵皮石斛組培苗細菌污染的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種能夠有效阻斷鐵皮石斛組培苗被細菌污染的方法。

本發明通過下列技術方案完成：一種阻斷鐵皮石斛組培苗被細菌污染的方法，其特征在于包括以下步驟：

1）納米銅母液制備，將納米銅放入滅菌蒸餾水中，在40-60℃溫度下冰浴20-40分鐘，之后在該冰浴條件下，放入超聲波細胞破碎儀中處理20-40分鐘，得到質量濃度為0.1%的納米銅母液；

2）納米銅母液稀釋，在步驟1）的納米銅母液中加入滅菌蒸餾水，稀釋成質量濃度為10^-2 %的納米銅溶液，送入烘箱中，升溫至60-70℃后保溫，維持納米銅的活性；

3）消毒液配制，將優潔1003消毒液加入到無菌蒸餾水中，至質量濃度為0.2%，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min，得消毒液；

4）混合培養基Ⅰ制備，將下列培養基MS+NAA 0.05ml/l + 6-BA 0.1ml/l + 香蕉泥50g/l + 馬鈴薯50g/l + 白糖30g/l + 瓊脂7g/l，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min后，冷卻至50-60℃，并在無菌條件下，按照1L培養基加入20ml質量濃度為10^-2 %的納米銅溶液的量，將質量濃度為10^-2%的納米銅溶液加入到培養基中，并攪拌混合均勻，得混合培養基Ⅰ；

5）鐵皮石斛種子消毒，將鐵皮石斛破出果莢、取出種子，放入經高壓滅菌處理過的紗布袋中，置入質量濃度為70%的酒精中浸泡40-60秒；然后依次用無菌水洗滌2-4次、質量濃度為0.1%的升汞滅菌6-10min、無菌水洗滌2-4次，再用質量濃度為10%的次氯酸鈉浸泡6-10min，無菌水洗滌2-4次；再用步驟3）的消毒液浸泡1-2min，取出，于無菌操作臺上，用無菌吸水紙吸干，得消毒種子；

6）鐵皮石斛種子培養，將步驟5）的消毒種子均勻放在步驟4）的混合培養基Ⅰ中，暗培養至種子萌發后，轉入1000lux弱光下，培養25-30天，得幼胚；

7）鐵皮石斛種子分化培養，將步驟6）幼胚移至22-26℃、1000lux的無菌環境中，培養6-8天，移至光照條件下繼續培養至鐵皮石斛幼胚分化；