[發明專利]一種液質聯用法檢測禽畜組織中多種抗生素殘留的方法

有效

• 申請號: 202011107354.8
• 申請日: 2020-10-16
• 公開（公告）號: CN112326815B
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 陳倩倩;李想;唐陽剛;張勇;王珂
• 申請（專利權）人: 麗珠集團新北江制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/72
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

本發明公開了一種液質聯用法檢測禽畜組織中多種抗生素殘留的方法，該方法包含樣品的前處理和液質聯用含量測定兩部分。檢測的抗生素主要是市面上常用的驅蟲類獸藥包括多拉菌素、賽拉菌素、莫西克丁以及米爾貝肟。其中前處理的主要操作步驟是：取除毛的皮下肉組織，勻漿機打碎成泥狀備用。用提取試劑超聲波提取后用自制固相萃取小柱富集。前處理方法能有效除去蛋白等雜質，且方法簡便、環保。液質聯用采用SRM模式檢測，分析方法靈敏度高、檢測快。

技術領域

本發明屬于殘留藥物的高效液相色譜串聯質譜儀分析領域，具體涉及一種測定禽畜組織中多種抗生素殘留的液質聯用方法。

背景技術

多拉菌素(Doramectin)、賽拉菌素(Selamectin)、莫西克丁(Moxidectin)以及米爾貝肟(Melbemycin?Oxime)是常用的獸用抗生素。單用或者相比于傳統抗生素，這些抗生素抗蟲譜廣，無論對于三綱12目73屬的寄生蟲，亦或是禽畜體內外的寄生蟲均有效。獸用抗生素經人體吸收后會經過血液循環傳遞到人體組織內，長期使用會形成抗生素耐受或者肝腎毒害，尤其是孕婦或者哺乳期婦女，食用獸用抗生素超標的藥物后會造成胎兒或者嬰幼兒致畸、大腦發育不良等嚴重危害。因此建立一種測定禽畜組織中新型獸藥類抗生素殘留的方法具有重要意義。

現有技術中，禽畜動物組織殘留藥物的提取主要有兩方面的難點，一是提取是否徹底完全；二是樣品的富集和濃縮。如何選擇能充分提取目標化合物的提取試劑，選擇提取方法，除去蛋白等干擾物，富集產物并且選擇專屬性、靈敏度高的檢測方法是食物來源藥物殘留中亟需解決的問題。

發明內容

為了準確快速測定禽畜組織中多種抗生素殘留，本申請提供了一種快速、準確測定特定殘留量的液質聯用方法，該方法主要包含樣品的進樣前處理和液質聯用含量測定兩部分。

本發明所采取的技術方案是：

本發明的第一方面，提供了一種測定禽畜組織殘留抗生素的液質聯用方法，包括樣品前處理和液質聯用，所述樣品前處理包括以下步驟：

1)剪碎禽畜的皮下無骨肉，勻漿；

2)勻漿的組織中加入提取試劑，超聲波，離心過濾收集上清液；所述提取試劑由乙腈、乙醇或丙酮的一種與三氟乙酸組成；

3)將稀釋上清液經過固相萃取小柱洗脫得待測液，待色譜分析；

其中，液質聯用使用的流動相A是乙腈，流動相B是甲酸水溶液。

根據本發明的實施例，流動相B是0.1～0.5％甲酸水溶液。

根據本發明的實施例，還包括供試品溶液、對照品溶液；所述對照品溶液的制備方法：分別精密稱取多拉菌素、賽拉菌素、莫西克丁以及米爾貝肟對照品適量，加乙腈溶解稀釋為濃度為0.1ug/ml的對照品溶液。

根據本發明的實施例，步驟2)提取試劑由乙腈、乙醇、丙酮中的一種與30％三氟乙酸按照體積比2～5:1組成；優選的，由乙腈與30％三氟乙酸按照體積比2:1組成。

根據本發明的實施例，步驟2)提取試劑的加入量為勻漿組織5-10倍。

根據本發明的實施例，步驟2)所述提取試劑由乙腈、乙醇或者丙酮的一種和三氟乙酸按照體積比為2:1組成；所述三氟乙酸為30％三氟乙酸。

乙腈、乙醇、丙酮均對待測組分溶解性良好，考慮環境和職業危害因素，優選為乙腈。三氯乙酸可以很好的使細胞破壁，從而釋放出待測化合物。超聲波提取操作簡單且能有效提取組織中的藥物殘留，經考察20-25min可以提取完全。

自制的C18固相萃取小柱，能選擇性吸附藥物成分，可以起到除去雜質和富集組分的雙重作用。洗脫劑采用乙腈、乙醇或者丙酮的作用同提取部分，同樣的優選乙腈。

根據本發明的實施例，步驟2)超聲波提取的時間為20-25min。