[發(fā)明專利]一種干細(xì)胞妊娠紋修復(fù)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011106268.5
• 申請(qǐng)日: 2020-10-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112190533A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張興民
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 濰坊卡多娜生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K8/99
• 分類號(hào): A61K8/99;A61K8/98;A61K8/67;A61K8/73;A61Q19/00;A61Q19/08;C12N5/0775
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本發(fā)明公開(kāi)了一種干細(xì)胞妊娠紋修復(fù)方法，包括如下步驟：S1：制備臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞因子上清液；S2：取S1中的部分臍帶，剪切成若干小段，然后用無(wú)菌PBS清洗，直至肉眼不可見(jiàn)血絲；S3：將S2中的清洗完成后的小段臍帶剪碎移入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，使用含胎牛血清的α?MEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，待顯微鏡下細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)皿面積的80%時(shí)，加入胰蛋白酶消化傳代；S4：當(dāng)S3中細(xì)胞傳至第3代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，將部分細(xì)胞傳代至干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)后通過(guò)離心機(jī)采用低速離心法獲得干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基上清，然后向干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基上清中加入連接纖維蛋白，混合即可得到輔助修復(fù)溶液備用；S5：制備脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞因子上清液；S6：制備修復(fù)產(chǎn)品。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及妊娠紋修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種干細(xì)胞妊娠紋修復(fù)方法。

背景技術(shù)

妊娠紋的形成主要是由于女性在妊娠期間體重的增長(zhǎng)和腹部的膨隆使得皮膚的彈力纖維與膠原纖維因外力牽拉而受到不同程度的損傷或斷裂，進(jìn)而導(dǎo)致皮膚變薄變細(xì)，彈力及肌膚的承托力盡失，因此產(chǎn)生松跨下陷感；而且由于真皮層中的膠原蛋白及彈力蛋白不足以負(fù)荷皮膚一下子被撐的太大，而引起的纖維斷裂，使得皮膚凹陷和擠壓毛細(xì)血管在皮膚表面形成傷痕狀的條紋。

目前市場(chǎng)上的妊娠紋修復(fù)產(chǎn)品雖具有一定效果，但存在著修復(fù)率低，效果達(dá)不到患者的要求，修復(fù)效果不是非常理想的問(wèn)題；同時(shí)，現(xiàn)有的妊娠紋修復(fù)霜、修復(fù)膏等都含有化工類產(chǎn)品，具有一定的毒副作用，在長(zhǎng)期使用后，皮膚容易出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)或發(fā)炎，對(duì)皮膚傷害較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種干細(xì)胞妊娠紋修復(fù)方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種干細(xì)胞妊娠紋修復(fù)方法，包括如下步驟：

S1：制備臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞因子上清液；

S2：取S1中的部分臍帶，剪切成若干小段，然后用無(wú)菌PBS清洗，直至肉眼不可見(jiàn)血絲；

S3：將S2中的清洗完成后的小段臍帶剪碎移入細(xì)胞培養(yǎng)皿中，使用含胎牛血清的α-MEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，待顯微鏡下細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)皿面積的80%時(shí)，加入胰蛋白酶消化傳代；

S4：當(dāng)S3中細(xì)胞傳至第3代對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，將部分細(xì)胞傳代至干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)后通過(guò)離心機(jī)采用低速離心法獲得干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基上清，然后向干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基上清中加入連接纖維蛋白，混合即可得到輔助修復(fù)溶液備用；

S5：制備脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞因子上清液；

S6：將輔助修復(fù)溶液、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞因子上清液、脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞因子上清液、阿拉伯半乳聚糖、葡萄糖酸鋅、葡萄糖酸銅、抗壞血酸鈉按比例15-20：20-30：10-15：1-3：1-2：1-2：0.1-2均勻混合得到修復(fù)產(chǎn)品。

作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞因子上清液制備方法，用組織保護(hù)液清洗臍帶組織表面血液，去除表皮和血管組織，取出華通膠清洗后剪成5-20塊狀，平鋪在培養(yǎng)皿內(nèi)。

作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，沿培養(yǎng)皿的邊緣慢慢加入間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)液至組織淹沒(méi)即可；將培養(yǎng)皿放進(jìn)CO₂濃度為5%的37℃培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)至第3-7天；繼續(xù)添加培養(yǎng)液9-11天，之后每1-3天進(jìn)行一次換液。

作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，當(dāng)培養(yǎng)皿內(nèi)的細(xì)胞融合度達(dá)到50%-70%時(shí)，往培養(yǎng)皿內(nèi)加熱消化酶，使得組織脫離培養(yǎng)皿，將組織種于康寧T175培養(yǎng)瓶中，加入30ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)3-4天，待細(xì)胞融合度達(dá)到90%時(shí)，收集上清液，并對(duì)上清液進(jìn)行離心，去除細(xì)胞碎片；離心后的上清液加入15ml的超濾管中進(jìn)行濃縮，去除多余水分使體積濃縮為原體積的一半，濃縮液過(guò)0.22μm濾膜除菌，得到臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞因子上清液。