[發明專利]一種雙重信號擴增探針、傳感器、檢測方法及用途

有效

• 申請號: 202011105124.8
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112210588B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 吳昊;鄒霈;吳軍;王洪勇;劉婭靈;韓國慶
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12N15/11
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 李郁

1.一種雙重信號擴增探針，其特征在于，包括：

適體探針，3個單鏈序列自組裝而成，所述單鏈序列包括序列S1、序列S2和用于結合靶標的適體序列S3；所述序列S1由5’端到3’端依次包括與適體序列S3互補的序列ST和第一結合序列；所述序列S2由5’端到3’端依次包括與適體序列S3互補的序列ST和第一結合序列的互補序列；序列S1由5’端到3’端依次包括序列a、序列b、序列c、序列d、序列e和序列f；序列a、序列b、序列c和序列d為序列ST；序列e和序列f為第一結合序列，序列S1核苷酸序列如SEQID?NO.1所示；序列S2由5’端到3’端依次包括序列a、序列b、序列c、序列d，與序列f互補的序列f*，和與序列e互補的序列e*；序列f*和序列e*為第一結合序列的互補序列，序列S2的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；適體序列S3由5’端到3’端依次包括與序列d互補的序列d*，與序列c互補的序列c*，與序列b互補的序列b*，和與序列a互補的序列a*；適體序列S3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；

發夾探針，由5’端到3’端依次包括第二結合序列，G-四鏈體序列，和可與序列ST部分互補的序列ST*；所述第二結合序列與G-四鏈體序列的3’端序列部分互補；所述第二結合序列與序列ST*部分互補，并在序列ST*的3’端形成突出末端；序列ST*與序列ST互補時，在序列ST*的3’端形成平末端；發夾探針由5’端到3’端依次包括序列b，序列g，序列h，序列b*和序列a*；序列b和序列g為第二結合序列，序列h為G-四鏈體序列，序列b*和序列a*為序列ST*；序列g與序列h的3’端序列互補，發夾探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。

2.一種雙重信號擴增檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的雙重信號擴增探針。

3.根據權利要求2所述的雙重信號擴增檢測試劑盒，其特征在于，所述適體探針與發夾探針的摩爾比為(1-3):(1-5)。

4.根據權利要求3所述的雙重信號擴增檢測試劑盒，其特征在于，

所述適體探針與發夾探針的摩爾比為2:3。

5.根據權利要求2-4任一項所述的雙重信號擴增檢測試劑盒，其特征在于，還包括核酸外切酶Exo?I，核酸外切酶Exo?I和適體探針的用量比為(10-20):(0.01-0.03)，比例關系為U/nmol。

6.根據權利要求5所述的雙重信號擴增檢測試劑盒，其特征在于，

核酸外切酶Exo?I和適體探針的用量比為15:0.02，比例關系為U/nmol。

7.根據權利要求2-4任一項所述的雙重信號擴增檢測試劑盒，其特征在于，

還包括核酸外切酶Exo?III，核酸外切酶Exo?III和發夾探針的用量比為(15-30):(0.01-0.05)，比例關系為U/nmol。

8.根據權利要求7所述的雙重信號擴增檢測試劑盒，其特征在于，

核酸外切酶Exo?III和發夾探針的用量比為20:0.03，比例關系為U/nmol。

9.一種雙重信號擴增檢測傳感器，其特征在于，包括利用權利要求權利要求1所述的雙重信號擴增探針，或權利要求2-8任一項所述的雙重信號擴增檢測試劑盒。

10.根據權利要求9所述的雙重信號擴增檢測傳感器，其特征在于，

在所述的傳感器中，適體探針濃度為50-150nM，Exo?I的量為10-20U，發夾探針的濃度為50-250nM，Exo?III的量為15-20U。

11.根據權利要求10所述的雙重信號擴增檢測傳感器，其特征在于，

在所述的傳感器中，適體探針濃度為100nM，Exo?I的量為15U，發夾探針的濃度為150nM，Exo?III的量為20U。