[發(fā)明專(zhuān)利]用于滲透和固定血細(xì)胞的試劑及分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011096509.2
• 申請(qǐng)日: 2020-10-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112504793B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 俞秋興;張海方
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 核工業(yè)總醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N1/30
• 分類(lèi)號(hào): G01N1/30;G01N1/34;G01N15/14
• 代理公司: 蘇州創(chuàng)元專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 32103
• 代理人: 范晴

1.用于滲透和固定血細(xì)胞的試劑，其特征是，包括固定溶液、滲透溶液以及清洗溶液；

所述固定溶液包括體積濃度為1%~20%的跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)化合物、以及質(zhì)量濃度為0.1mg/ml~10mg/ml的糖類(lèi)化合物，所述固定溶液還包括物質(zhì)的量濃度為0.3mol/L~12.3 mol/L的脲類(lèi)化合物；其中，所述跨細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)化合物為二甲基亞砜或環(huán)丁砜；

所述滲透溶液包括質(zhì)量濃度為0.01％~10％表面活性劑，所述滲透溶液還包括質(zhì)量濃度為0.2％~15％蛋白質(zhì)或質(zhì)量濃度為0.2％~15％氨基酸；

所述脲類(lèi)化合物包括咪唑烷基脲，重氮烷基脲或者乙內(nèi)酰脲；

所述滲透溶液中的蛋白質(zhì)包括脫脂奶粉、酪蛋白、人血清白蛋白或者牛血清白蛋白；所述氨基酸包括甘氨酸、精氨酸或者賴(lài)氨酸；

所述糖類(lèi)化合物包括海藻糖、麥芽糖、葡萄糖、殼聚糖、硫酸葡聚糖；

所述表面活性劑為二異丁基萘磺酸鈉。

2.分析方法，用于滲透細(xì)胞膜并且保留細(xì)胞內(nèi)外表位以用于流式細(xì)胞術(shù)分析，其特征在于，使用權(quán)利要求1所述的試劑，其步驟包括如下：

1）將細(xì)胞膜表面標(biāo)記物結(jié)合樣品中的細(xì)胞組分10~15min，然后用所述固定溶液固定細(xì)胞，以實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)、脂蛋白、核酸分子的部分交聯(lián)；

2）洗滌含有細(xì)胞的樣品，將含有細(xì)胞的樣品與所述滲透溶液混合形成樣品混合物；

3）將步驟2）中的所述混合物孵育5~10min使細(xì)胞膜能滲透大分子物質(zhì)，同時(shí)保留細(xì)胞組分用于與細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物結(jié)合；

4）將所述細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物加入樣品混合物中，將樣品混合物再孵育10~15min，以使得細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物與被保留的細(xì)胞組分相結(jié)合，再用流式細(xì)胞術(shù)分析樣品混合物；

其中，細(xì)胞內(nèi)外表位包括細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物抗原位點(diǎn)和細(xì)胞膜表面抗原位點(diǎn)。