[發明專利]基于微流控檢測非酒精性脂肪性肝病患者腸道微生物狀態的方法

有效

• 申請號: 202011092286.2
• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112195234B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 魏紅;李曉營;張立燕
• 申請（專利權）人: 魏紅
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/689;C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 北京北匯律師事務所 11711
• 代理人: 高元吉

1.微流控芯片和恒溫反應緩沖液凍干品在制備用于基于微流控核酸檢測技術檢測非酒精性脂肪性肝病患者體內腸道微生物狀態的檢測試劑盒中的用途，其特征在于，所述微流控芯片具有魚骨刺模式設計，包括液相小室模塊、微流路系統、加樣模塊和用于控制微流路系統的負壓排氣系統，所述微流控芯片上設置多個液相小室，所述多個液相小室各自分別采用有利于恒溫擴增的溫度均衡控制和防止因液體滲漏導致檢測污染的多邊形結構、底部錐形結構；

所述多個液相小室各自分別包含對于腸道微生物菌群中的一種微生物特異的探針，且所述探針固定于所述液相小室內，所述探針的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1-8所示；

恒溫反應緩沖液凍干品包含引物對，所述引物對的核苷酸序列為5’CATCGAATTATACCACATGT3’和如SEQ?ID?NO:9-19、21-24所示的序列；

所述腸道微生物菌群包含雙歧桿菌、乳酸桿菌、擬桿菌、白色念珠菌、產氣莢膜梭狀芽胞桿菌、普雷沃氏菌、大腸桿菌和腸球菌；

所述各液相小室分別通過微管道與氣閥連接，并設置為能夠通過所述氣閥控制微管道內微量液體流動至各液相小室。

2.根據權利要求1所述的用途，其中，所述核酸檢測技術包括以下步驟：

(1)?提供微流控芯片；

(2)?提供分離自受試者的糞便樣品的核酸，并使所述核酸與所述多個液相小室內的液相接觸；和

(3)?在65℃溫度下使核酸與液相的混合液反應30分鐘，然后使用微陣列芯片檢測儀檢測所述多個液相小室內的核酸信息。

3.根據權利要求1所述的用途，其中，所述微流控芯片上進一步設置用于對陰、陽性質控樣本反應的對照小室。

4.根據權利要求3所述的用途，其中，所述對照小室各自分別采用多邊形結構，底部采用錐形結構，從而有利于恒溫擴增的溫度均衡控制和防止因液體滲漏導致檢測污染。