[發明專利]一種用于鑒定龍眼品種的SSR分子標記引物組及其應用有效
| 申請號： | 202011085920.X | 申請日： | 2020-10-12 |
| 公開（公告）號： | CN112266972B | 公開（公告）日： | 2022-07-05 |
| 發明（設計）人： | 徐振江;馬強;劉洪;饒得花;江院;陳孟強;唐軒;黃展權;方超;邱友媚 | 申請（專利權）人： | 華南農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11;G16B25/20;G16B20/30 |
| 代理公司： | 廣州專理知識產權代理事務所(普通合伙) 44493 | 代理人： | 張鳳 |
| 地址： | 510630 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 鑒定 龍眼 品種 ssr 分子 標記 引物 及其 應用 | ||
1.一種SSR分子標記引物組用于鑒定龍眼品種的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
1)提取龍眼品種的DNA；
2)以步驟1)提取的DNA為模板，選取表型差異最大的10種龍眼品種，選取多態性最豐富的且帶型清晰的引物，篩選出24組SSR分子標記引物；
3)利用24組SSR分子標記引物對龍眼品種進行PCR擴增以及毛細管電泳，進行樹狀分析判定，品種間差異位點數≥3為不同品種，品種間差異位點數＜3為近似品種或者相同品種；
其中，所述24組SSR分子標記引物組包括24對龍眼SSR引物，所述24對龍眼SSR引物中的正向引物和反向引物的核苷酸序列分別如序列表中SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.48所示。
2.權利要求1所述的SSR分子標記引物組用于鑒定龍眼品種的方法，其特征在于，應用所述SSR分子標記引物組于龍眼品種區分鑒定以及DNA指紋圖譜構建。
3.權利要求1所述的SSR分子標記引物組用于鑒定龍眼品種的方法，其特征在于，應用所述SSR分子標記引物組于龍眼遺傳多樣性分析。
4.由權利要求1所述的SSR分子標記引物組用于鑒定龍眼品種的方法，其特征在于，步驟1)所述提取龍眼品種的DNA的方法包括：
a)預熱CTAB抽提液和β-巰基乙醇的混合物；
b)取龍眼的嫩綠葉片，置于預冷過的研缽中，加入PVP進行快速研磨得粉末；
c)將研磨得到的粉末加入到步驟a)的混合物中，混勻，吸取上清液，加入等體積的氯仿和異戊醇的混合物，離心；
d)吸取步驟c)離心后的上清液加入苯酚、氯仿和異戊醇的混合物，離心；
e)吸取步驟d)離心后的上清液加入醋酸鈉和無水乙醇，離心，收集沉淀；
f)洗滌沉淀，溶解，離心，獲取沉淀，備用。
5.由權利要求4所述的SSR分子標記引物組用于鑒定龍眼品種的方法，其特征在于，步驟a)所述CTAB抽提液的配方成分包括十六烷基三乙基溴化銨、氯化鈉、乙二胺四乙酸二鈉鹽溶液、三羥甲基氨基甲烷鹽酸溶液以及聚乙烯吡咯烷酮。
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