[發明專利]一種用于動脈粥樣硬化早期預警的分子標志物及其應用

在審

• 申請號: 202011080892.2
• 申請日: 2020-10-11
• 公開（公告）號: CN112159842A
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 姜怡鄧;張慧萍;張輝;劉圓;馬芳;楊安寧;馬勝超
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學;寧夏醫科大學總醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/113;C12N15/11;A61K45/00;A61K31/713;A61P9/10
• 代理公司: 寧夏合天律師事務所 64103
• 代理人: 郭立寧

1.一種用于動脈粥樣硬化早期預警的分子標志物，其特征在于，所述的動脈粥樣硬化早期預警的分子標志物為長鏈非編碼RNA，包括以下步驟：

(1) MTT（四唑鹽)比色法檢測不同濃度的Hcy對內皮細胞增殖的影響，篩選合適濃度；

(2) 最適濃度Hcy（同型半胱氨酸）干預細胞后，以對照組（0 μmol/L Hcy）和實驗組（100 μmol/L Hcy）為分組，細胞活力染色檢測細胞活力改變；

(3) 最適濃度Hcy干預細胞后，以對照組和實驗組為分組，流式細胞術檢測內皮細胞凋亡水平變化；

(4) 最適濃度Hcy干預細胞后，以對照組和實驗組為分組，實時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測LncRNA DINO（DNA損傷誘導的非編碼RNA）的表達；

(5) 轉染LncRNA DINO siRNA（DNA損傷誘導的非編碼RNA的干擾核糖核酸），干擾LncRNA DINO后，細胞活力染色檢測細胞活力改變；

(6) 構建LncRNA DINO siRNA，干擾LncRNA DINO后，流式細胞術檢測內皮細胞凋亡水平變化；

（7）構建LncRNA DINO siRNA長鏈非編碼RNA，干擾LncRNA DINO后，蛋白免疫印跡（Western Blot）檢測凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2的表達。

2.根據權利要求1所述的用于動脈粥樣硬化早期預警的分子標志物，其特征在于，同型半胱氨酸干預內皮細胞lncRNA DINO（DNA損傷誘導的非編碼RNA）顯著增高，干擾lncRNADINO后，內皮細胞凋亡顯著降低。

3.根據權利要求1所述的用于動脈粥樣硬化早期預警的分子標志物，其特征在于，用于檢測所述的長鏈非編碼RNA（LncRNA DINO）的引物也在本發明的保護范圍之內。

4.根據權利要求1所述的用于動脈粥樣硬化早期預警的分子標志物，其特征在于，用于抑制所述的長鏈非編碼RNA的試劑為干擾RNA(si RNA)。

5.權利要求1所述用于動脈粥樣硬化早期預警的分子標志物的應用，其特征在于，所述動脈粥樣硬化中的長鏈非編碼RNA在該病的預防及診斷中的應用。