[發明專利]一種基于原子力顯微術的腫瘤外泌體誘導細胞惡變過程的檢測方法

在審

• 申請號: 202011080743.6
• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112285386A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 王作斌;鞠拓宇;王樹偉;王佳佳;陳玉娟;楊帆;姜曉琳;董莉彤;宋正勛;許紅梅;張景然
• 申請（專利權）人: 長春理工大學
• 主分類號: G01Q60/24
• 分類號: G01Q60/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于原子力顯微術的腫瘤來源外泌體誘導細胞惡變過程的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)用接種液培養腫瘤細胞至鋪滿培養皿底，取腫瘤細胞上清液，通過高速離心機進行梯度離心，用0.22μm孔徑的濾器過濾梯度離心后的上清液，再將過濾后的上清液加入到超濾管中進行離心，最后加入磷酸鹽緩沖液再次離心得到腫瘤來源外泌體；

(2)利用掃描電鏡對步驟(1)獲取的腫瘤來源外泌體進行粒徑大小分析，通過蛋白免疫印記法對相關蛋白生物標志物CD9,CD63和CD81進行驗證；

(3)利用MTT法篩選腫瘤來源外泌體濃度，將1500μg/mL濃度的腫瘤來源外泌體與正常細胞共培養，檢測細胞的增殖和遷移能力；

(4)利用原子力顯微術在液態環境下對良性細胞轉化的惡性細胞進行多維信息檢測。

2.根據權利要求1所述的一種基于原子力顯微術的腫瘤來源外泌體誘導細胞惡變過程的檢測方法，其特征在于，接種液為含有體積分數為10％的無外泌體胎牛血清的DMEM液體培養基。

3.根據權利要求1所述的一種基于原子力顯微術的腫瘤來源外泌體誘導細胞惡變過程的檢測方法，將鋪滿培養皿底的腫瘤細胞取上清液進行梯度離心，其特征在于，包括以下步驟：

步驟I,取腫瘤細胞上清液至離心管，放入高速離心機中，離心參數設定為溫度4℃，轉速2,000×g，時間10min；

步驟II,取步驟I離心后的上清液至新的離心管，放入高速離心機中，離心參數設定為溫度4℃，轉速10,000×g，時間30min。

4.根據權利要求1所述的一種基于原子力顯微術的腫瘤來源外泌體誘導細胞惡變過程的檢測方法，其特征在于，將經濾器過濾后的上清液加入到超濾管中進行離心，然后向超濾管中加入磷酸鹽緩沖液再次離心得到腫瘤來源外泌體，離心參數均為溫度4℃，轉速4,000×g，時間30min。

5.根據權利要求1所述的一種基于原子力顯微術的腫瘤來源外泌體誘導細胞惡變過程的檢測方法，其特征在于，多維信息包括細胞形貌、力學特性和電學特性。