[發明專利]FRT細胞株在制備篩選CFTR調節劑的制劑或試劑盒中的應用

在審

• 申請號: 202011074687.5
• 申請日: 2020-10-09
• 公開（公告）號: CN112280820A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 郝峰;楊敬研;姜琳;鄭鍇;解宇浩;張嘉琪
• 申請（專利權）人: 吉林醫藥學院
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/10;G01N21/64
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳

本發明涉及生物醫藥領域，特別涉及FRT細胞株在制備篩選CFTR調節劑的制劑或試劑盒中的應用。倒置熒光顯微鏡下觀察到CFTR表達在細胞膜上，YFP?H148Q/I152L表達于胞漿中；成功構建共表達CFTR和YFP?H148Q/I152L的FRT細胞模型；熒光變化斜率值與CFTR調節劑濃度成劑量依賴關系，該模型可篩選CFTR調節劑；熒光變化斜率值可反映胞漿內cAMP濃度，該模型可敏感檢測胞漿內cAMP濃度。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，特別涉及FRT細胞株在制備篩選CFTR調節劑的制劑或試劑盒中的應用。

背景技術

第二信使是細胞內的信號轉導的啟動組成部件之一，主要包括：環腺苷酸(cAMP)、環磷酸鳥苷(cGMP)、鈣離子(Ca²⁺)、肌醇三磷酸(IP3)、甘油二酯(DAG)等。cAMP作為胞漿內重要的第二信使，可調控細胞內諸多重要的生理過程，如參與細胞的增值與分化、激素的合成與分泌、基因表達、信號轉導、神經節突觸傳遞的調節等。胞漿內cAMP也參與許多病理過程，是治療心臟病、急性白血病、慢性呼吸道疾病、某些腫瘤等疾病的潛在靶點。因此，胞漿內第二信使cAMP一直是科研領域的研究熱點。目前，檢測胞漿內cAMP的方法主要有報告基因檢測法、競爭法、放射性標記法等。報告基因檢測法缺點是蛋白的半衰期較短，常規分析的重復性差。競爭法缺點是操作繁瑣，試劑耗費高。放射性標記法缺點是需要特定的儀器設備，對操作人員技術要求高，對操作人員可能有潛在風險。

發明內容

有鑒于此，本發明建立了一種基于CFTR可敏感檢測胞漿內第二信使cAMP的細胞模型。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明還提供了FRT細胞株在檢測胞漿內cAMP濃度的應用；所述FRT細胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表達；

其中，相對熒光強度變化值/slope值/斜率值與細胞內cAMP濃度呈現良好的正相關；

所述相對熒光強度變化值/slope值/斜率值計算如下：

0s～1.4s的相對熒光值的平均值；

y：2.4s～14.8s與0.6s～13s做線性回歸分析所得到的線性回歸的結果。

本發明還提供了FRT細胞株在制備檢測胞漿內cAMP濃度的制劑或試劑盒中的應用；所述FRT細胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表達；

其中，相對熒光強度變化值/slope值/斜率值與細胞內cAMP濃度呈現良好的正相關；

所述相對熒光強度變化值/slope值/斜率值計算如下：

0s～1.4s的相對熒光值的平均值；

y：2.4s～14.8s與0.6s～13s做線性回歸分析所得到的線性回歸的結果。

本發明還提供了FRT細胞株在制備預防和/或治療與胞漿內cAMP相關疾病的藥物中的應用；所述FRT細胞株中ANO1和YFP-H148Q/I152L共表達；

其中，相對熒光強度變化值/slope值/斜率值與細胞內cAMP濃度呈現良好的正相關；

所述相對熒光強度變化值/slope值/斜率值計算如下：

0s～1.4s的相對熒光值的平均值；

y：2.4s～14.8s與0.6s～13s做線性回歸分析所得到的線性回歸的結果。