[發明專利]一株廣藿香青枯病菌的低致病力突變株及其應用

有效

• 申請號: 202011046563.6
• 申請日: 2020-09-29
• 公開（公告）號: CN112300975B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 賀紅;張宇瑤;李巧;張泳
• 申請（專利權）人: 廣州中醫藥大學（廣州中醫藥研究院）
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;A01N63/20;A01P1/00;C12R1/01
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 崔紅麗

本發明公開一株廣藿香青枯病菌的低致病力突變株及其應用，屬于植物病害生物防治技術領域。本發明以廣藿香青枯病的強致病力病原菌株Kosakonia sp.Pa82為材料，經Tn5轉座子插入突變得到低致病力突變株Pa82?87?1。Pa82?87?1的生長環境和營養需求和致病菌Pa82相同，能夠與青枯病菌競爭生存位點和營養物質，并通過誘導植物的潛在抗病性，發揮植物疫苗的作用，從而抑制或減緩致病菌的侵染和繁殖。以低致病力突變株Pa82?87?1為供試菌株，對廣藿香青枯病進行生物防治試驗，結果表明，該突變株對廣藿香青枯病的防效可達71.70％，可作為防治廣藿香青枯病的生防菌株。

技術領域

本發明屬于植物病害生物防治技術領域，特別涉及一株廣藿香青枯病菌的低致病力突變株及其應用。

背景技術

廣藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.為唇形科刺蕊草屬植物，以干燥地上部分入藥，為廣東道地藥材、“十大廣藥”之一。廣藿香在生產中面臨嚴重的青枯病害。青枯病是由細菌引起的一種維管束病害，在植物整個生長期內均可發生，高溫多雨的季節發病最盛。發病植株莖葉萎蔫、下垂直至全部枯死。廣藿香植株一旦發病，病情就能迅速蔓延，導致大面積的植株死亡，造成毀滅性損失。

目前青枯病主要采用化學防治。由于病原細菌能在土壤中生存，噴灑化學藥劑只能殺死土層表面的細菌。農藥的反復使用，容易使細菌產生抗藥性，并造成藥材農藥殘留和環境污染。近年來，生物防治在農作物土傳病害的防治中發揮重要作用。拮抗細菌因對病原菌具有較強的抑制作用而受到廣泛的研究，但也有研究表明，室內篩選出的拮抗細菌在大田中由于不適應生態環境，防治效果不穩定。無致病力或弱致病力菌株是由病原菌弱化或突變而來，其生長環境和營養需求和致病菌相同，可以與病原菌競爭并誘導植物的免疫反應，通過發揮植物疫苗的作用以防治病害。

發明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的首要目的在于提供一株廣藿香青枯病菌的低致病力突變株。

本發明的另一目的在于提供上述廣藿香青枯病菌的低致病力突變株的應用。

本發明以廣藿香青枯病的強致病力病原菌株Kosakonia sp.Pa82為材料，利用電擊轉化法，對其進行Tn5轉座子插入突變，獲得突變體。通過對大量突變體的致病性篩選，得到對廣藿香致病力減弱的突變株Pa82-87-1。對低致病力突變株Pa82-87-1的Tn5轉座子插入位點基因進行克隆，生物信息學分析結果顯示，突變株Pa82-87-1的轉座子插入位點基因的編碼蛋白為VI型分泌系統蛋白VgrG。以低致病力突變株Pa82-87-1為供試菌株，對廣藿香青枯病進行生物防治試驗，結果表明，該突變株對廣藿香青枯病的防效可達70％以上(71.70％)。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

本發明提供一株廣藿香青枯病菌的低致病力突變株，命名為科薩克氏菌Kosakonia sp.Pa82-87-1，是以廣藿香青枯病的強致病力病原菌株Kosakonia sp.Pa82為材料，通過Tn5轉座子插入突變獲得。

所述的菌株Kosakonia sp.Pa82-87-1的保藏信息：保藏單位：廣東省微生物菌種保藏中心(GDMCC)，保藏編號：GDMCC No：61048，保藏地址：廣東省廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓廣東省微生物研究所，保藏日期：2020年7月16日。

對低致病力突變株Pa82-87-1的Tn5轉座子插入突變基因進行克隆，生物信息學分析結果顯示，突變株Pa82-87-1的轉座子插入突變基因的編碼蛋白為VI型分泌系統蛋白VgrG。

對低致病力突變株Pa82-87-1進行防治廣藿香青枯病的試驗。以預接種低致病力突變株Pa82-87-1再接種野生菌株Pa82的植株為生防組，用水預處理再接種野生菌株Pa82的植株為陽性對照組，只用水處理的植株為陰性對照組，結果表明該突變株對廣藿香青枯病的防效可達71.70％。