[發明專利]一種與湖羊肌肉細胞增殖相關的LncRNA標志物及其檢測引物和應用

在審

• 申請號: 202011030671.4
• 申請日: 2020-09-27
• 公開（公告）號: CN112011628A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 孫偉;張衛博;王善禾;王利宏;蘇銳;曹修凱
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/113
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 杜春秋

本發明公開了一種與湖羊肌肉細胞增殖相關的LncRNA標志物及其檢測引物和應用，所述LncRNA標志物為LncRNA?TCONS_00153891，其序列為SEQ ID NO.1。本發明在前期已經發現miRNA?29a具有抑制湖羊肌肉細胞增殖作用的基礎上，通過生物信息學預測能夠結合miRNA?29a的LncRNA，再利用雙熒光素酶報告系統、RT?qPCR、CCK?8以及Western blot技術進一步驗證了LncRNA?TCONS_00153891在湖羊肌肉細胞增殖過程中表達起顯著上調作用，本發明提出的LncRNA?TCONS_00153891可作為生物標志物應用于鑒定湖羊肌肉細胞的增殖。

技術領域

本發明涉及一種與湖羊肌肉生長發育相關的LncRNA標志物及其檢測引物和應用，具體地涉及LncRNA-TCONS_00153891在湖羊肌肉細胞增殖過程中的應用，屬于畜牧獸醫技術領域。

背景技術

湖羊是世界著名的綿羊品種，不僅繁殖性能優勢突出，而且肉骨比高，肉質細嫩、多汁，深受大眾喜愛。然而，由于湖羊屠宰性能較差，不斷制約著湖羊肉質性狀的開發利用。因此，科學地開展湖羊肉質性狀調控機制的研究具有重大意義。

隨著分子生物學及生物信息學的快速發展，肌肉生長發育的研究也逐步深入、細化。近年來研究發現，存在肌肉特異性LncRNA，能夠競爭性結合與其相關的miRNA，阻止或抑制miRNA沉默其靶基因，形成相互作用的網絡系統。具有這樣功能的LncRNA被定義為ceRNA，參與肌肉生長發育過程。近年來，LncRNA參與肌肉發育的研究已有很多，但是多集中于模式動物研究上。目前，LncRNA作為一種調控性非編碼RNA，對豬肌肉發育的調控作用已見報道，然而對肌肉發育存在顯著差異的湖羊肌肉組織中LncRNA鮮有研究。

本發明研究發現，YAP1作為Hippo通道中的主效基因，在肌肉生長發起過程中扮演重要的角色；同時，通過生物信息學預測發現YAP1是miRNA-29a的一個關鍵靶標基因，LncRNA-TCONS_00153891與miRNA-29a也可能存在結合位點，且通過實驗驗證發現miRNA-29a已被證明與骨骼肌生長發育相關。于是本研究提出一種猜想：是否存在一種LncRNA，與miRNA-29a及YAP1可能形成ceRNA網絡參與湖羊肌肉細胞增殖，為進一步探究湖羊肌肉細胞增殖的分子機制提供理論依據。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的之一在于提供一種與湖羊肌肉細胞增殖相關的LncRNA標志物及其檢測引物。

本發明的目的之二在于提供LncRNA的應用，具體為一種鑒定湖羊肌肉生長拐點的手段，通過檢測LncRNA分子標志物的表達水平來判斷測定日齡是否到達湖羊肌肉的生長拐點。

為了實現以上目的，本發明采用如下技術方案：

本發明提供了一種與湖羊肌肉細胞增殖相關的LncRNA標志物，該LncRNA標志物為LncRNA-TCONS_00153891，其序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明還提供了檢測LncRNA-TCONS_00153891基因表達的試劑（即LncRNA標志物的檢測引物）在鑒定湖羊肌肉生長拐點中的應用。

進一步，所述試劑選自：

特異性擴增LncRNA-TCONS_00153891的引物。

較佳的，所述的LncRNA-TCONS_00153891基因如SEQ IDNO.1所示，特異性擴增LncRNA-TCONS_00153891基因的上、下游引物分別如SEQ ID NO.2、SEQ IDNO.3所示，YAP1的上、下游引物序列分別如SEQ IDNO.4、SEQ IDNO.5所示，miRNA-29a序列如SEQ IDNO.6所示。