[發明專利]用于檢測天冬氨酰氨肽酶的近紅外熒光分子探針、制備方法及用途

有效

• 申請號: 202011028775.1
• 申請日: 2020-09-25
• 公開（公告）號: CN112062755B
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 劉熠;柳旺旺;阿力亞·鐵木爾
• 申請（專利權）人: 中國藥科大學
• 主分類號: C07D405/06
• 分類號: C07D405/06;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 冒艷

本發明公開了用于檢測天冬氨酰氨肽酶的近紅外熒光分子探針。該探針分子式為C₃₅H₃₆N₃O₄⁺，結構式如下。該探針以N末端天冬氨酸作為響應基團檢測天冬氨酰氨肽酶具有非常優異的選擇性，響應效果好，并且其近紅外吸收與熒光的發射的特性使其能很好的運用于活體成像，吸收和發射均在近紅外區具有較強的生物體穿透性，還能減少生物體自發熒光的干擾，檢測高效。

技術領域

本發明涉及熒光分子探針、制備方法及其用途，特別涉及用于檢測天冬氨酰氨肽酶的近紅外熒光分子探針。

背景技術

天冬氨酰氨肽酶屬于基質金屬蛋白酶18家族，在生物體內廣泛分布，通過水解N末端天冬氨酸來調節生物活性肽的活性，從而參與到各種生理或病理過程中，例如血管再生，水解平衡，血壓等。生物體內不正常的天冬氨酰氨肽酶濃度往往與一些癌癥有關，包括腦癌、直腸癌和乳腺癌等。為了弄清天冬氨酰氨肽酶在腫瘤發生、發展中的作用，就要對其體內水平進行實時監測。目前對天冬氨酰氨肽酶的檢測手段主要為免疫印跡和酶聯免疫吸附，這兩種手段都需要提取酶之后再檢測，不能實時精確反映體內天冬氨酰氨肽酶的水平。只有實時的，精確的對體內天冬氨酰氨肽酶進行監測才能促進對天冬氨酰氨肽酶在癌癥中作用機理的研究。

傳統檢測天冬氨酰氨肽酶的方法需要提取純化天冬氨酰氨肽酶后再檢測，在提取過程中會導致酶的失活，這樣檢測的結果只能反應提取到的酶的量而不能體現酶的活性。此外，體內也有失活的天冬氨酰氨肽酶，而天冬氨酰氨肽酶發揮作用依靠其活性。因此檢測有活性的天冬氨酰氨肽酶更能真實體現天冬氨酰氨肽酶的作用。利用天冬氨酰氨肽酶可以特異性識別N末端天冬氨酸并切除的特性，既能實現對天冬氨酰氨肽酶的特異性檢測，又能真實體現其活性。

發明內容

發明目的：本發明目的是提供具有選擇性強、響應效果好、實時高效的用于檢測天冬氨酰氨肽酶的近紅外熒光分子探針。

本發明另一目的是提供所述近紅外熒光分子探針的制備方法和用途。

技術方案：本發明提供一種用于檢測天冬氨酰氨肽酶的近紅外熒光分子探針，

其分子式為C₃₅H₃₆N₃O₄⁺，結構式如下：

所述的用于檢測天冬氨酰氨肽酶的近紅外熒光分子探針的制備方法，包括如下步驟：

(1)冰浴條件下，將二氯甲烷緩慢加入到N-叔丁氧羰基-D-天冬氨酸1-叔丁酯中，冷卻后攪拌，然后緩慢加入2-(7-氮雜苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸鹽和N，N-二異丙基乙胺，攪拌；

(2)向步驟(1)中的反應液中加入化合物1，攪拌；

(3)去除冰浴條件，恢復至室溫，攪拌，反應，反應結束的時機為溶液變藍；

(4)反應液進行過濾，取濾液；

(5)冰浴條件下向濾液中加入三氟乙酸，攪拌，反應結束的時機為溶液中不溶物不再增多；

(6)去除冰浴，攪拌，恢復室溫，反應；

(7)將(6)中反應液過濾，取濾渣，即得。

進一步地，所述N-叔丁氧羰基-D-天冬氨酸1-叔丁酯與二氯甲烷的體積比為1∶(5-10)。

進一步地，所述步驟(5)中三氟乙酸與濾液的體積比1mmol∶5-10ml。