[發明專利]高純度的甜菊醇糖苷

在審

• 申請號: 202011020696.6
• 申請日: 2014-05-28
• 公開（公告）號: CN112538512A
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 因德拉·普拉卡什;辛西婭·邦德斯;潘卡杰·索尼;阿韋季克·馬科西安;加林·西里爾;奧雷利安·巴迪;羅貝爾·泰·阿萊
• 申請（專利權）人: 譜賽科有限責任公司
• 主分類號: C12P19/56
• 分類號: C12P19/56;C12P19/18;C07H1/06;C07H15/256;A24B15/30;A24B15/10;A23L27/30;A23L2/60
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 劉小立;鄭霞

1.一種用于產生靶甜菊醇糖苷的方法，該方法包括以下步驟：

a.提供包含具有至少一個碳原子的有機化合物的起始組合物；

b.提供含有選自甜菊醇生物合成酶、UDP-糖基轉移酶的至少一種酶的并且任選地提供UDP-葡萄糖循環酶的微生物；

c.使該微生物與含有該起始組合物的介質接觸以產生包含至少一種靶甜菊醇糖苷的介質。

2.一種用于產生靶甜菊醇糖苷的方法，該方法包括以下步驟：

a.提供包含具有至少一個碳原子的有機化合物的起始組合物；

b.提供包含選自甜菊醇生物合成酶、UDP-糖基轉移酶、和任選地UDP-葡萄糖循環酶的至少一種酶的生物催化劑；

c.使該生物催化劑與含有該起始組合物的介質接觸以產生包含至少一種靶甜菊醇糖苷的介質。

3.如權利要求1或2所述的方法，該方法進一步包括以下步驟：

從該介質純化該靶甜菊醇糖苷以提供高度純化的靶甜菊醇糖苷組合物。

4.如權利要求1或2所述的方法，其中該有機化合物選自下組，該組由以下各項組成：多元醇、碳水化合物、甜菊醇糖苷及其組合。

5.如權利要求2所述的方法，其中該生物催化劑是一種酶、或包含一種或多種酶的細胞，所述酶能夠將該有機化合物轉化為靶甜菊醇糖苷。

6.如權利要求1或2所述的方法，其中該靶甜菊醇糖苷選自下組，該組由以下各項組成：甜菊苷、reb A、reb D、reb D2、reb E、reb M、reb M2及其混合物。

7.如權利要求1或2所述的方法，其中該酶選自下組，該組由以下各項組成：香葉基香葉基二磷酸合酶、柯巴基二磷酸合酶、貝殼杉烯合酶、貝殼杉烯氧化酶、貝殼杉烯酸13-羥化酶(KAH)、甜菊醇合成酶、脫氧木酮糖5-磷酸合酶(DXS)、D-1-脫氧木酮糖5-磷酸還原異構酶(DXR)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤蘚糖醇合酶(CMS)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤蘚糖醇激酶(CMK)、4-二磷酸胞苷-2-C-甲基-D-赤蘚糖醇2,4-環二磷酸合酶(MCS)、l-羥基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-二磷酸合酶(HDS)、l-羥基-2-甲基-2(E)-丁烯基4-二磷酸還原酶(HDR)、乙酰乙酰-CoA硫解酶、截短的HMG-CoA還原酶、甲羥戊酸激酶、磷酸甲羥戊酸激酶、甲羥戊酸焦磷酸脫羧酶、細胞色素P450還原酶、UGT91D2、UGTSL2、UGT76G1、或含有選自S42A、F46I、I190L、S274G、I295M、K303G、F314S、K316R、K393R、V394I、I407V、N409K、N409R、Q425E、Q432E、S447A和S456L的一個或多個點突變的UGT76G1。

8.如權利要求3所述的方法，其中該高度純化的靶甜菊醇糖苷組合物具有按干重計超過95％的靶甜菊醇糖苷純度。

9.如權利要求8所述的方法，其中該靶甜菊醇糖苷選自甜菊苷、reb A、reb E、reb D、reb D2、reb M、和reb M2。

10.如權利要求3所述的方法，其中該靶甜菊醇糖苷是多態的，且任選地是reb D或rebM。

11.具有下列結構的分離的且高度純化的reb D2：

12.一種制備reb D2的方法，該方法包括：

a.使包含reb A的起始組合物與選自能夠將reb A轉化為reb D2的酶的組中的一種酶、UDP-葡萄糖、以及任選的UDP-葡萄糖循環酶接觸，以產生包含reb D2的組合物；并且

b.分離、并且任選地純化該包含reb D2的組合物，其中reb D2任選地具有按干重計超過95％的純度。