[發明專利]一種用于發酵法生產D-泛酸的菌株及發酵法生產D-泛酸的方法

有效

• 申請號: 202011015874.6
• 申請日: 2020-09-24
• 公開（公告）號: CN112195143B
• 公開（公告）日: 2022-10-14
• 發明（設計）人: 柳志強;鄒樹平;鄭裕國;牛坤;周海巖;王之見;趙闊
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P13/02;C12R1/19
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

1.一種發酵法生產D-泛酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)活化培養：將大腸桿菌接種至平板培養基上活化培養，得到活化菌；

(2)種子培養：將步驟(1)得到的活化菌接種至種子培養基中進行培養，得到種子液；

(3)發酵培養：按照發酵培養基體積的15％的接種量，取步驟(2)得到的種子液，接種至發酵培養基中發酵培養生產D-泛酸，初始攪拌轉速400rpm/min；維持溶氧值為15％；每2小時調整一次葡萄糖進料速率，控制殘余葡萄糖濃度為1g/L；在開始補料葡萄糖后，同時往發酵罐中以10mL/h的喂入速度開始喂入40g/L異亮氨酸溶液；

步驟(1)中所述大腸桿菌為將大腸桿菌serA基因與panB基因、panC基因分別克隆到質粒pTrc99A中獲得重組質粒后，將重組質粒轉染到保藏號為CCTCC NO：M2018914的大腸桿菌中進行過表達所得，其中，panB基因序列如SEQ ID NO.1所示，panC基因序列如SEQ ID NO.2所示，serA基因序列如SEQ ID NO.3所示；

步驟(3)中發酵培養基為：葡萄糖56g/L，硫酸銨11.8g/L，酵母提取物2g/L，磷酸二氫鉀0.8g/L，硫酸鎂0.5g/L，β-丙氨酸1.5g/L，碳酸鈣10g/L，VB12 0.001g/L，VB1 0.001g/L，鹽溶液1ml/L，絲氨酸100mg/L，異丙基硫代半乳糖苷0.1mmol/L；

所述鹽溶液為：CuCl₂ 10g/L，FeSO₄·7H₂O 10g/L，ZnSO₄·7H₂O 1g/L，CuSO₄ 0.20g/L，NiCl₂·7H₂O 0.02g/L。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述平板培養基為：蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl 5g/L、瓊脂粉20g/L，pH＝6.8-7.0。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述種子培養基為：蛋白胨10g/L、酵母膏10g/L、NaCl 5g/L，pH＝6.8-7.0。