[發(fā)明專利]分泌抗Spondin1單克隆抗體雜交瘤細胞株及其單抗、應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010999718.1
• 申請日: 2020-09-22
• 公開（公告）號: CN112063591B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 莊光磊;臧榮余;殷霞
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州仁端生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/30;G01N33/543;G01N33/574;G01N33/577;G01N33/58
• 代理公司: 北京科家知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 宮建華

本發(fā)明提供了分泌抗Spondin1單克隆抗體雜交瘤細胞株保藏編號分別為CCTCC NO:C202093和CCTCC NO:C202094。本發(fā)明還提供了分泌抗Spondin1單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體；本發(fā)明提供含有所述單克隆抗體的試劑盒。本發(fā)明通過獲得分泌抗Spondin1單克隆抗體雜交瘤細胞株，獲得針對Spondin1不同抗原表位的單克隆抗體2種，特異性強且靈敏度高，可通過配對檢測體液、組織中人底板反應(yīng)蛋白Spondin1含量，應(yīng)用于檢測Spondin1蛋白過量表達或診斷以Spondin1蛋白異常表達為表征的疾病的產(chǎn)品的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及Spondin1單克隆抗體雜交瘤細胞株。

背景技術(shù)

細胞外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白1，即Spondin1，是由SPON1基因編碼的一種細胞粘附蛋白，最初是從脊椎動物的胚胎底板分離出來，有調(diào)節(jié)胚胎中樞神經(jīng)系統(tǒng)軸突生長的作用，還能促進血管平滑肌細胞增殖并且抑制血管生成。Spondin1蛋白含有807個氨基酸，分子量為90.97Kda，含有若干個二硫鍵，為典型的分泌型細胞外基質(zhì)糖蛋白。

研究發(fā)現(xiàn)Spondin1在很多組織中有表達，如卵巢、胚胎生長板軟骨、牙周組織、骨關(guān)節(jié)炎軟骨等。隨著人們對腫瘤發(fā)病機理研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)Spondin1在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、浸潤和轉(zhuǎn)移過程中起著非常重要的作用，如Spondin1可通過SPON1/Fak/Src 相聯(lián)通路控制骨肉瘤轉(zhuǎn)移，也有報道Spondin1蛋白在卵巢癌上皮細胞中表達量升高。因此Spondin1的定量檢測具有重要的臨床意義。而現(xiàn)有的檢測試劑盒多是R-Spondin1的試劑盒，體系中多采用多克隆抗體；抗體特異性差，不能區(qū)分Spondin1高度同源家族蛋白，由于其抗體本身效價或特異性的原因，也使得其對Spondin1檢測的臨床效用受到局限，降低了樣本檢測的特異性，同時也對靈敏度產(chǎn)生一定的影響。因此急需獲得特異性識別Spondin1蛋白單克隆抗體，滿足臨床樣本檢測要求，提高檢測的靈敏度和特異性。

有報道表明Spondin1蛋白在卵巢癌上皮細胞中表達量升高。因此Spondin1的定量檢測具有重要的臨床意義。而現(xiàn)有的檢測試劑盒多是R-Spondin1的試劑盒，體系中多采用多克隆抗體；抗體特異性差，不能區(qū)分Spondin1高度同源家族蛋白，由于其抗體本身效價或特異性的原因，也使得其對Spondin1檢測的臨床效用受到局限，降低了樣本檢測的特異性，同時也對靈敏度產(chǎn)生一定的影響。因此急需獲得特異性識別Spondin1蛋白單克隆抗體，滿足臨床樣本檢測要求，提高檢測的靈敏度和特異性。

現(xiàn)有的檢測試劑盒多是R-Spondin1的試劑盒，且體系中多采用多克隆抗體；抗體特異性差，不能區(qū)分Spondin1高度同源家族蛋白，由于其抗體本身效價或特異性的原因，也使得其對Spondin1檢測的臨床效用受到局限，降低了樣本檢測的特異性，同時也對靈敏度產(chǎn)生一定的影響。本發(fā)明通過雙抗體夾心的原理，利用高親和力高特異性配對單克隆抗體制備檢測試劑盒，采用全自動化學(xué)發(fā)光儀檢測樣品濃度。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述存在的問題，本發(fā)明的目的之一在于提供一種分泌抗Spondin1單克隆抗體雜交瘤細胞株；本發(fā)明的目的之二在于提供分泌抗Spondin1單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體；本發(fā)明的目的之三在于提供含有所述單克隆抗體的試劑盒；本發(fā)明的目的之四在于提供所述單克隆抗體在制備檢測Spondin1蛋白試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明技術(shù)方案的其中一方面，提供了分泌抗Spondin1單克隆抗體雜交瘤細胞株，雜交瘤細胞株為2D3F5和/或4B6F2，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（保藏中心地址為：中國.武漢.武漢大學(xué)，保藏日期皆為2020年6月19日，電話：[phone]），2D3F5保藏號保藏編號分別為CCTCC NO: C202093，4B6F2保藏編號為CCTCC NO: C202094。