[發明專利]一種可用于指示ACE2表達量的細胞株及其構建方法與應用有效
| 申請號： | 202010978943.7 | 申請日： | 2020-09-17 |
| 公開（公告）號： | CN112143704B | 公開（公告）日： | 2022-07-26 |
| 發明（設計）人： | 蔣明貴;方娟;劉軍鵬;劉陽;何勝;劉彩云;許澎;屈飛 | 申請（專利權）人： | 湖南普拉特網絡科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90;C12N15/65;C12Q1/02;C12Q1/34;C12R1/91 |
| 代理公司： | 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205 | 代理人： | 肖云 |
| 地址： | 410000 湖南省長沙市長*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 指示 ace2 表達 細胞株 及其 構建 方法 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種可用于指示ACE2表達量的構建方法，其特征在于：包括以下步驟：
S1、設計并構建能切割ACE2基因組的sgRNA/Cas9蛋白共表達載體；
S2、構建含ACE2基因同源序列、標記基因的donor載體；
S3、將sgRNA/Cas9蛋白共表達載體和donor載體共轉染工具細胞Huh7-細胞，篩選陽性克隆，得到細胞株；
其中，所述sgRNA的核苷酸序列如Seq ID No.1所示；
所述ACE2基因同源序列包括同源左臂序列和同源右臂序列，所述同源左臂序列如SeqID No.2所示，所述同源右臂序列如Seq ID No.3所示。
2.根據權利要求1所述的可用于指示ACE2表達量的構建方法，其特征在于：所述標記基因包含熒光標記基因。
3.根據權利要求2所述的可用于指示ACE2表達量的構建方法，其特征在于：所述熒光標記基因選自GFP熒光標記基因。
4.根據權利要求2所述的可用于指示ACE2表達量的構建方法，其特征在于：所述標記基因還包括抗生素篩選基因。
5.根據權利要求4所述的可用于指示ACE2表達量的構建方法，其特征在于：所述抗生素篩選標記基因選自嘌呤霉素抗性基因。
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