[發(fā)明專(zhuān)利]一種抗重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子納米抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010970856.7
• 申請(qǐng)日: 2018-06-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113105546B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝秋玲;熊盛;陳純;雷云
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K16/22
• 分類(lèi)號(hào): C07K16/22;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/68;G01N33/574;A61K39/395;A61P35/00;C12R1/19
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運(yùn)貞

本發(fā)明公開(kāi)了一種抗重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子納米抗體及其應(yīng)用。所述的抗重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子納米抗體具有分子質(zhì)量小、特異性強(qiáng)、親和力高、穩(wěn)定性高、易表達(dá)、細(xì)胞/血管穿透性強(qiáng)、抗原結(jié)合能力強(qiáng)、可在原核表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)等特點(diǎn)，克服了傳統(tǒng)抗體的開(kāi)發(fā)周期長(zhǎng)、穩(wěn)定性較低、保存條件苛刻等缺陷，可有效中和腫瘤和纖維化患者體內(nèi)過(guò)度表達(dá)的bFGF，能有效抑制血管的生成、腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，還可用于抑制肝、肺或腎等纖維化的形成。同時(shí)，該納米抗體在大腸桿菌中可實(shí)現(xiàn)高效表達(dá)，在治療腫瘤抗體藥物或癌癥診斷試劑盒或試劑中具有良好的應(yīng)用前景。

本發(fā)明專(zhuān)利申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮椤?01810573403.3”的分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)的申請(qǐng)日為“2018年06月06日”，申請(qǐng)?zhí)枮椤?01810573403.3”，發(fā)明名稱(chēng)為“一種抗重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子納米抗體及其應(yīng)用”。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種抗重組人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子納米抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

抗體(Antibody)，也叫免疫球蛋白(Immunoglobulin)，是一種能特異性結(jié)合抗原的糖蛋白。傳統(tǒng)抗體以一個(gè)或者多個(gè)“Y”字形單體存在，每個(gè)“Y”字形單體由4條多肽鏈組成，包含兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈。傳統(tǒng)抗體分子量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，造成其穩(wěn)定性和穿透性差，而且其研發(fā)和生產(chǎn)成本高，導(dǎo)致其使用費(fèi)用高，限制了它的進(jìn)一步的應(yīng)用。因此，一些新型小分子抗體的研發(fā)成為了研究重點(diǎn)，如：Fab抗體、F(ab)₂抗體、單鏈抗體(scFv)、納米抗體等。

1993年，Hamers Casterman等首次報(bào)道了駱駝血中存在著天然缺失輕鏈的奇特抗體，即重鏈抗體(Heavy-Chain Antibody,HCAb)。通過(guò)基因工程技術(shù)克隆其可變區(qū)，可得到只含有重鏈可變區(qū)組成的抗體片段，即重鏈單域抗體VHH(Variable Domain of HeavyChain of Heavy-Chain Antibody)。由于其分子量只有傳統(tǒng)抗體的十分之一，而長(zhǎng)度更是在幾個(gè)納米的級(jí)別，因此也被稱(chēng)作納米抗體(Nanobody，Nb)。它具有分子質(zhì)量小、穩(wěn)定性高、易表達(dá)、細(xì)胞/血管穿透性強(qiáng)、抗原結(jié)合能力強(qiáng)、可在原核表達(dá)系統(tǒng)中進(jìn)行表達(dá)等特點(diǎn)，兼具了傳統(tǒng)抗體與小分子藥物的優(yōu)勢(shì)。比之傳統(tǒng)的大分子抗體，納米抗體幾乎完美克服了開(kāi)發(fā)周期長(zhǎng)、穩(wěn)定性較低、保存條件苛刻等缺陷，而且小分子物質(zhì)不易引起免疫原性；相對(duì)于同為小分子抗體Fab，scFv等分子，納米抗體只有一個(gè)重鏈，表達(dá)更為容易，而且也不像單鏈抗體(scFv)等小分子抗體那樣易互相沾粘，甚至聚集成塊，因此成為抗體藥物和試劑研究領(lǐng)域的新型抗體分子，具有良好的發(fā)展前景。目前，納米抗體已逐步應(yīng)用于疾病治療、疾病診斷、放射性成像等領(lǐng)域，它在疾病治療領(lǐng)域的應(yīng)用為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。納米抗體治療疾病，如：抗腫瘤機(jī)制主要表現(xiàn)為其阻止抗原和受體的結(jié)合反應(yīng)，如Coppieters等利用抗TNF-α的納米抗體可拮抗TNF-α與其受體的特點(diǎn)來(lái)治療關(guān)節(jié)炎、Roovers等采用EGF-EGFR納米抗體來(lái)阻止EGF與EGFR結(jié)合從而治療癌癥。

堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic Fibroblast Growth Factor，bFGF)，又稱(chēng)為成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Fibroblast Growth Factor 2，F(xiàn)GF-2)，是1974年由Gospodarowiz等從牛腦垂體和腦組織的提取物中純化得到的成纖維細(xì)胞的有絲分裂原，它由146個(gè)氨基酸組成，因其等電點(diǎn)為9.6，故稱(chēng)為堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子。bFGF的生物學(xué)作用極其廣泛，它在血管形成、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合與組織修復(fù)、促進(jìn)組織再生和神經(jīng)組織生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中起著十分重要的作用。