[發明專利]一種急性熱應激動物模型及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 202010960778.2
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN112219787B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 李偉豪;劉逸雷
• 申請（專利權）人: 佛山科學技術學院
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 劉俊文

本發明公開了一種急性熱應激動物模型及其構建方法和應用，通過將動物在36～42℃的溫度下飼養12h～18h作為造模期，然后在18～20℃的溫度下飼養5～7d這一構建方法得到該動物模型。本發明所提出的急性熱應激動物模型具有穩定，成本低，操作簡單等優點，填補了急性熱應激動物模型缺失的空白，為抗熱應激藥物的研制和急性熱應激的科研探究提供了良好的工具。

技術領域

本發明屬于動物模型領域，具體涉及一種急性熱應激動物模型及其構建方法和應用。

背景技術

研究表明，適用于大多數家禽的環境溫度范圍為18至20℃，超過此范圍，家禽便會產生熱應激，而無論是急性的還是慢性的，熱應激都會嚴重阻礙家禽的生長；熱應激會降低家禽的生產性能和免疫功能，從而導致雞的免疫器官失重，對外來抗原的抗性被削弱，特別是在長期熱應激的情況下，免疫器官會引起不可逆轉的損害和其他并發癥，從而更容易加重疾病甚至致死。

目前，對于家禽的熱應激的研究還不夠深入，而且主要是慢性熱應激的報道居多，這主要是因為缺乏動物模型方面的研究，也影響了抗熱應激藥物的研發工作；此外，動物模型中，由于動物自身免疫能力是會不斷變化的，因此，在用藥后判斷究竟是動物自身免疫能力的作用還是藥物的作用是動物模型的關鍵，因此，提出一種良好的急性熱應激動物模型十分有意義。

發明內容

本發明的目的在于解決上述的技術問題，具體通過以下技術方案實現：

一種急性熱應激動物模型的構建方法，包括以下步驟：將動物在36～42℃的溫度下飼養12h～18h作為造模期，然后在18～20℃的溫度下飼養5～7d。

發明人發現動物在高溫度環境下產生熱應激，動物脾臟中HSP70，IFN-α，IFN-β和IL-1β的蛋白表達量會產生較大的起伏變化，在其初始階段，動物的免疫能力反而會增強到一個頂峰，因此，發明人根據不斷的實驗，發現12～18h作為熱應激期，然后在正常溫度下飼料7～9d后，動物的免疫功能會降低最低，在此期間的前2d(即5～7d)使用抗應激藥物，可以避免動物自身免疫能力的干擾，從而對抗應激藥物的藥效有一個客觀評價，也能最大區分開各種藥物之間藥效的作用程度的客觀差距。

優選地，在造模期之前，將動物預先喂養12h，自由飲水和進食。

優選地，所述動物為雞、鴨、鵝中的一種。

優選地，所述動物為雞，其體重為2～3kg。

本發明根據上述的構建方法得到的一種急性熱應激動物模型，在評價抗熱應激藥物效果領域中有著較大應用前景，具體應用過程包括以下步驟：將動物分成兩組，分別喂食正常飼料和添加有抗熱應激藥物的飼料，飼養4～5d，然后將動物處死，收集脾臟和肝臟，測定脾臟和肝臟的器官指數，并測定脾臟中HSP70，IFN-α，IFN-β和IL-1β的蛋白表達量。

優選地，測定脾臟中的HSP70，IFN-α，IFN-β和IL-1β的蛋白表達量的具體過程為：提取脾臟的蛋白質，變性后進行電泳，然后將蛋白條帶印跡到轉印膜上，將其浸入至封閉溶液中；以β-肌動蛋白作為內部對照，針對HSP70，IFN-α，IFN-β和IL-1β的一抗進行免疫印跡，然后用緩沖溶液洗滌后與HRP標記兔抗小鼠IgG抗體一起溫育1h，然后使用發光試劑盒進行顯色，最后采用ImageJ軟件得出HSP70，IFN-α，IFN-β和IL-1β的蛋白質表達量。

優選地，所述轉印膜為聚偏二氟乙烯膜。

優選地，所使用的電泳凝膠為10％或15％的SDS-PAGE。

本發明的有益效果為：本發明所提出的急性熱應激動物模型具有穩定，成本低，操作簡單等優點，填補了急性熱應激動物模型缺失的空白，為抗熱應激藥物的研制和急性熱應激的科研探究提供了良好的工具。

附圖說明

圖1為實施例1中HSP70在41℃的條件下不同時長的蛋白表達量；