[發明專利]基于氟硼骨架的大Stokes位移的熒光探針TQBF-NBD及其制備方法和應用

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• 申請號: 202010960770.6
• 申請日: 2020-09-14
• 公開（公告）號: CN112110946A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 王輝;宋相志;任曉杰;李小佳
• 申請（專利權）人: 河南凱普瑞生物技術有限公司
• 主分類號: C07F5/02
• 分類號: C07F5/02;C09K11/06;G01N21/64
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 冉珊敏

1.基于氟硼骨架的大Stokes位移的熒光探針TQBF-NBD，其特征在于，所述熒光探針TQBF-NBD具有如下結構式：

。

2.權利要求1所述的熒光探針TQBF-NBD的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（a）將2,4-二乙基-1,2,3,4-四氫喹喔啉水楊醛、對氨基苯酚和TsOH溶于乙醇中，在氬氣保護下加熱回流2小時，停止反應后，將反應液冷卻至室溫，旋干得到暗棕色油狀液體粗產物；

（b）將步驟（a）制得的暗棕色油狀液體粗產物溶于1,2-二氯乙烷中，再加入DIEA和BF₃?OEt₂，在氬氣保護下80 ℃反應4 h，停止反應后，向反應液中加入1,2-二氯乙烷，再將反應液倒入NaHCO₃溶液中，分出有機相，水相用二氯甲烷萃取3次，合并有機相，用無水硫酸鈉干燥，減壓旋干得到油狀液體，再經柱層析分離得到化合物TQBF-OH；

（c）將步驟（b）制得的產物TQBF-OH、NBD-Cl和無水三乙胺溶于無水乙腈中，室溫下反應過夜，有棕色固體析出，將其過濾，用無水乙醇洗滌2次后，經柱層析分離得到產物TQBF-NBD。

3.根據權利要求2所述的熒光探針TQBF-NBD的制備方法，其特征在于：所述步驟（a）中2,4-二乙基-1,2,3,4-四氫喹喔啉水楊醛、對氨基苯酚和TsOH的物質的量比為1:（1-1.2）：0.05。

4.根據權利要求2所述的熒光探針TQBF-NBD的制備方法，其特征在于：所述步驟（b）中粗產物、DIEA和BF₃?OEt₂的體積比為（2-2.5）:1:1。

5.根據權利要求2所述的熒光探針TQBF-NBD的制備方法，其特征在于：所述步驟（c）中每10μL無水三乙胺中添加0.1mmol 的化合物TQBF-OH和0.11 mmol的NBD-Cl。

6.根據權利要求2所述的熒光探針TQBF-NBD的制備方法，其特征在于：所述步驟（b）、（c）中柱層析采用的洗脫劑為V_二氯甲烷/V_乙醇 =100：（0-1）。

7.權利要求1所述的熒光探針TQBF-NBD在制備定量檢測生物硫醇的試劑中的應用，其特征在于：室溫下，將熒光探針TQBF-NBD溶解在pH=7.4的PBS緩沖溶液中配制成10 μM的檢測試劑，加入待測樣品，觀察熒光變化，根據熒光強度隨硫醇加入量的線性變化規律及檢測線計算公式：D= 3σ/k ，定量檢測生物硫醇，其中D為檢測線，σ為標準偏差，k為斜率。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述PBS緩沖溶液的濃度為0.01M，PBS緩沖溶液中含有體積分數20%的乙腈。

9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于：所述應用以在620nm處監測到紅光確定待測樣品含有GSH、以分別在620nm處和550nm處監測到強烈的紅色熒光和綠色熒光確定待測樣品中含有Cys/Hcy。