[發明專利]一種抗體檢測試劑、檢測方法及應用

在審

• 申請號: 202010957315.0
• 申請日: 2020-09-17
• 公開（公告）號: CN114199832A
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 劉書虎;汪艷濤;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 廣州市微米生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/533;G01N33/58
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種抗體檢測試劑、檢測方法及應用，該試劑包括孔板試劑、熒光標記的二抗、磷酸鹽緩沖液。通過不同色系的熒光及熒光組合，應用于判定樣本中是否含有目標抗體，從而提高了抗體檢測的準確性、靈敏度、特異性。

技術領域

本發明屬于免疫檢測領域，具體涉及一種抗體檢測試劑、檢測方法及應用。

背景技術

自身免疫性疾病（AID）是身體任何一個器官或組織都有可能發生，因其在早期缺乏特異性，通常病人初診不是在免疫科，而是在其他科室，這些科室的臨床醫生可能因對AID缺乏足夠的認識，所以在臨床診斷上容易導致誤診。

神經系統自身免疫性疾病是自身免疫性疾病中的一大類重要疾病，主要累及青中年人群，并具有免疫疾病的復雜性和神經系統疾病的高致死、致殘性的特點，因而受到臨床醫師和研究者的高度關注。但由于神經系統自身抗體種類繁多，作用機制各異，導致患者的臨床表現復雜，容易造成認識上的混亂。

目前，自身免疫性疾病的確診需要多種檢測手段，除臨床、病理、影像等檢測外，自身抗體檢測在AID診斷中有著不可替代的作用，在符合臨床、病理、影像等相關疾病的特征的情況下，抗體檢測已成為確定AID最重要的手段。神經系統自身抗體的試劑盒常用的原理是采用間接免疫熒光法制備，間接免疫熒光法保留了原基質的完整抗原譜，因而可同時檢測大量抗體，獲得較高的檢測效率。但是目前的檢測手段是采用熒光標記抗體，通過將陽性與陰性樣品的信號強度對比明顯，利用顯微鏡觀測組織或細胞內熒光的分布，在熒光信號較低的情況下僅通過一種熒光觀察容易導致誤判，從而導致用藥錯誤或者延誤患者及時治療。

發明內容

為解決上述抗體檢測中存在的問題，提高抗體檢測的靈敏度和準確性，本發明提供了一種抗體檢測試劑、檢測方法及應用。通過不同色系的熒光及熒光組合，判定不同色系的熒光斑點是否疊加以及熒光特征是否一致，應用于判定樣本中是否含有目標抗體，從而提高了抗體檢測的準確性、靈敏度、特異性。

一種抗體檢測試劑，該試劑包括孔板試劑、熒光標記的二抗、磷酸鹽緩沖液（PBS），其特征在于所述的孔板試劑包括表達熒光蛋白基因的細胞；熒光標記的二抗與表達熒光蛋白基因的細胞中的所述的熒光為不同色系的熒光。

進一步的，所述的孔板試劑還包括未表達熒光蛋白基因的細胞，其與表達熒光蛋白基因的細胞位于不同的區域。

進一步的，所述的表達熒光蛋白基因的細胞和未表達熒光蛋白基因的細胞分別固定在孔板上的加樣孔中上。

進一步的，所述的熒光標記的二抗中的使用的熒光物選自異硫氰酸熒光素、羅丹明、四甲基羅丹明異硫氰酸鹽、Texas Red、藻紅蛋白、碘化丙啶、Alexa Fluor系列、Dylight系列、iFluor系列。

進一步的，所述的一種抗體檢測試劑的制備方法包括：

1）表達熒光蛋白基因載體質粒構建；

2）表達熒光蛋白基因的細胞的制備；

3）細胞孔板制備。

進一步的，所述的細胞孔板制備包括：

1）在孔板上的加樣孔中上培養細胞；

2）將培養好的細胞去除培養基，使用磷酸鹽緩沖液清洗；

3）加入固定液將細胞固定；

4）將固定好的細胞使用封閉液封閉，干燥。

進一步的，所述的固定液選自醛類、甲醇、乙醇、丙酮、四氧化鋨、苦味酸、氯仿、鉻酸、升汞、重鉻酸中的一種或或多種制備成的溶液。

進一步的，所述的封閉液選自聚乙二醇類、BSA、SlowFade Diamond、SlowFadeGold、甘油、石蠟、明膠、蘆薈凝膠、防淬滅劑、礦物油中的一種或多種。

一種抗體檢測試劑的檢測方法，所述的檢測方法包括如下步驟：