[發明專利]一種聯合檢測非洲豬瘟病毒和豬偽狂犬病病毒野毒株的引物和探針、試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202010955621.0
• 申請日: 2020-09-11
• 公開（公告）號: CN112011646A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 馮小宇;王英超;高曉龍;程汝佳;梅力;陳會玲;張啟龍;吳迪;程敏姮
• 申請（專利權）人: 北京市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
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• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種聯合檢測非洲豬瘟病毒和豬偽狂犬病病毒野毒株的引物和探針、試劑盒及應用，引物和探針包括：檢測非洲豬瘟病毒的正向引物，其序列如SEQ ID NO:1所示；檢測非洲豬瘟病毒的反向引物，其序列如SEQ ID NO:2所示；檢測非洲豬瘟病毒的TaqMan探針，其序列如SEQ ID NO:3所示；檢測豬偽狂犬病病毒野毒株的正向引物，其序列如SEQ ID NO:4所示，檢測豬偽狂犬病病毒野毒株的反向引物，其序列如SEQ ID NO:5所示，檢測檢測豬偽狂犬病病毒野毒株的TaqMan探針，其序列如SEQ ID NO:6所示。本發明的聯合檢測非洲豬瘟病毒和豬偽狂犬病病毒野毒株的引物和探針、試劑盒及應用，可同時檢測非洲豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒野毒株的單一或混合感染，提高種豬場ASF和PR監測和診斷效率。

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，具體涉及一種聯合檢測非洲豬瘟病毒和 豬偽狂犬病病毒野毒株的引物和探針、試劑盒及應用。

背景技術

非洲豬瘟（African swine fever，ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swine fevervirus，ASFV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病。ASF 臨床癥狀表現為發熱、呼吸困難、皮膚發紺和淋巴結、腎、胃腸黏膜明顯出血，死亡率高達100%。由于該病對養豬業危害巨大，且病原學和流行病學較為復雜，尚無有效疫苗用于臨床，故世界動物衛生組織（OIE）將非洲豬瘟列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病。尤其是自2018年9月我國發生首例非洲豬瘟疫情以來，給我國生豬養殖造成非常嚴重的損失，甚至嚴重影響百姓的“菜籃子”，給我國經濟和民生保障帶來巨大影響。因此，相關部門相繼出臺相應的非洲豬瘟防控措施，尤其是種豬要嚴格規范種豬引種和調運，對跨省調運種豬必須嚴格開展ASFV檢測。

偽狂犬病(PR)是由偽狂犬病病毒(PRV)引起的一種家畜和多種野生動物 共患的高度接觸性傳染病，能夠造成發熱、奇癢、繁殖障礙、腦脊髓炎等癥狀。 PRV能感染反芻動物、嚙齒動物、食肉動物等，但豬是PRV唯一的傳播和貯存 宿主，可以隱性感染，長期帶毒。PRV可感染各個階段的豬，且臨床癥狀因日 齡而不同。尤其是PRV感染可造成種豬帶毒并垂直傳播，因此種豬一旦帶毒便 可終身帶毒、排毒，污染環境，引起仔豬的感染和發病。同時，由于PRV容易 發生缺失/插入變異，使得現有疫苗無法對豬群產生有效保護，加上目前生豬養 殖過程中PRV疫苗仍以活疫苗為主，存在毒力返強風險，所以PRV在我國豬群 長期廣泛流行難以控制，給我國養豬業造成巨大損失。因此《國家中長期動物疫 病防治規劃(2012-2020)》將PR列為凈化種畜禽重點疫病。

為實現種豬場ASF和PR的大規模篩查和監測，急需一種快速有效的 ASFV和PRV檢測方法。常規的分子診斷包括普通PCR，熒光定量PCR、基因 芯片及恒溫擴增檢測技術等，普通PCR、基因芯片及恒溫擴增檢測技術等方法 存在靈敏度低、成本高，開發技術難度大、易造成氣溶膠污染等缺點，而熒光定 量PCR比其他常規分子診斷技術具有靈敏性高、特異性好、通量高、污染低等 優勢。其中，實時TaqMan熒光定量PCR技術在動物疫病診斷、基因定性和定 量檢測等方面得到廣泛應用，并且已經成為當前病毒核酸快速檢測的主要方法。 目前，針對ASFV或PRV的實時熒光定量PCR檢測試劑盒類型比較單一，單純 檢測ASFV和PRV野毒或疫苗毒，無法實現ASFV和PRV的雙重檢測，這些試 劑盒費時費力且成本相對較高，難以應對當前豬場病毒混合感染的現狀。

因此，研發一種聯合檢測非洲豬瘟病毒和豬偽狂犬病病毒的雙重實時熒 光定量PCR試劑盒，有助于提高種豬場ASF和PR監測和診斷效率，確保種豬 場生物安全。

發明內容

本本發明解決的技術問題是提供一種聯合檢測非洲豬瘟病毒和豬偽狂犬 病病毒野毒株的引物和探針、試劑盒及應用，同時檢測非洲豬瘟病毒、豬偽狂犬 病病毒野毒株的單一或混合感染，提高種豬場ASF和PR監測和診斷效率。

為了解決上述問題，本發明的一個方面提供一種聯合檢測非洲豬瘟病毒 和豬偽狂犬病病毒野毒株的引物和探針，包括：