[發明專利]一種具有血管緊張素轉換酶抑制活性的環十六肽及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202010947264.3
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112010947B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 胡松青;樊壬水;劉光毅;侯軼
• 申請（專利權）人: 中新國際聯合研究院
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;A61K38/12;A61P9/12;A23L33/18
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 李盛洪

本發明公開了一種具有血管緊張素轉換酶抑制活性的環十六肽及其制備方法與應用。本發明的環十六肽包含16個氨基酸殘基，分子量為1735.02Da，其氨基酸序列為：LVYPFPGPIPNSLPQN，其中N端亮氨酸的氨基和C端天冬酰胺的羧基以肽鍵的形式連接形成環狀骨架。所述的環十六肽對應的線形肽來源于食用乳酸菌發酵牛奶中的β?酪蛋白，所述的環十六肽可通過介導環肽合成的酶催化制備得到。本發明的環十六肽具有很強的ACE抑制活性，對ACE的半抑制濃度IC₅₀為52.9μmol/L；具有較好的抗消化穩定性；且對細胞增殖影響小，細胞毒性低，安全性高；可用于降血壓功能食品或藥品的開發與制備，具有良好的應用前景。

技術領域

本發明屬于功能食品及生物醫藥領域，特別涉及一種具有血管緊張素轉換酶抑制活性的環十六肽及其制備方法與應用。

背景技術

高血壓是世界上死亡率最高的疾病之一，引起人們的廣泛關注。在調節人體血壓的眾多因素中，血管緊張素轉移酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)是影響升壓、降壓兩個系統平衡的主要因素，因此成為治療高血壓、心力衰竭等疾病的理想靶點。對ACE活性進行抑制，可以有效降低人體血壓。

人工合成的降血壓藥物，具有良好的降血壓效果，然而其缺點和副作用也不容忽視。如穩定性差，停藥后易反彈，引起咳嗽、過敏及血壓過低等癥狀。因此，研發獲得具有降壓效果更好、穩定性更強的ACE抑制劑，對于高血壓疾病的預防和治療有著迫切的需求。

環肽是指以氨基酸肽鍵形成的具有環狀骨架的多肽類化合物，剛性的環狀結構對其內在構象具有一定的約束作用。一般地，環肽的熱穩定性、結構穩定性、抗水解能力和生物利用度等比線性多肽更加優越。目前，已發掘很多具有ACE抑制活性的線性多肽化合物，但是，有關ACE活性的環肽則鮮見報道。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種具有血管緊張素轉換酶(ACE)抑制活性的環十六肽。所述的環十六肽可以通過介導環肽合成的酶催化底物十八肽(氨基酸序列為LVYPFPGPIPNSLPQNHV)環化得到，研究發現其對ACE具有很強的抑制活性。所述的環化的形式為，底物十八肽C端的組氨酸-纈氨酸(HV)序列斷裂，然后N端和C端首尾以肽鍵相連即得到環十六肽。

所述的底物十八肽是通過在十六肽(氨基酸序列為LVYPFPGPIPNSLPQN)C端添加組氨酸-纈氨酸(HV)序列得到。所述的十六肽是乳酸菌(Lb.jensenii ATCC 25258)發酵牛奶中β-酪蛋白的11-26片段多肽。

所述的環十六肽是所述的十六肽的環狀形式。研究發現所述的環十六肽比所述的十六肽，具有更強的ACE抑制活性和更高的抗消化穩定性。

本發明的另一目的在于提供所述的環十六肽的應用。

本發明的再一目的在于提供一種降血壓功能食品、ACE抑制劑或降血壓藥物。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種具有血管緊張素轉換酶抑制活性的環十六肽，其氨基酸序列為亮氨酸-纈氨酸-酪氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-異亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-絲氨酸-亮氨酸-脯氨酸-谷氨酰胺-天冬酰胺(LVYPFPGPIPNSLPQN，SEQ ID NO.1)，其中N端亮氨酸的氨基和C端天冬酰胺的羧基以肽鍵的形式連接，使得多肽形成環狀。

上述具有血管緊張素轉換酶抑制活性的環十六肽的制備方法，包括以下步驟：

S1、根據介導環肽合成的酶的識別特性，設計并合成所述的環十六肽對應的底物；

S2、將所得底物以及介導環肽合成的酶加入到反應緩沖液中，進行反應，得到反應液；

S3、將所得反應液進行純化，即獲得所述的具有血管緊張素轉換酶抑制活性的環十六肽。