[發明專利]一種鑒定GCDH基因同時含兩個突變位點位置的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010944847.0
• 申請日: 2020-09-10
• 公開（公告）號: CN112126684A
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 代冰;余艷;李淼;李慧源;朱加琳
• 申請（專利權）人: 長沙金域醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 長沙優企知識產權代理事務所(普通合伙) 43243
• 代理人: 周棟

本發明公開了一種鑒定GCDH基因同時含兩個突變位點位置的試劑盒及方法。所述試劑盒中含有如下引物對：F1：CCTTCCCAGCCTCGCGTCCCGAGTTTGAGT；R1：GAAGCAGCCCAGGAGCTCCCCCAT；F2：CCTTCCCAGCCTCGCGTCCCGAGTTTGTCA；R2：GAAGCAGCCCAGGAGCTCCCCGTC；所述兩個突變位點為C.148TA、C.508AG突變位點。本發明能夠鑒定C.148TA、C.508AG突變位點是在同一條染色體，還是不同的染色體上，工作量小，耗時短，易操作。

技術領域

本發明屬于生物醫學檢測技術領域，具體涉及一種鑒定PAH基因同時含兩個突變位點(C.148TA、C.508AG)位置的試劑盒及方法。

背景技術

戊二酸血癥I型是一種常染色體隱性遺傳有機酸血癥，由細胞內戊二酰輔酶A脫氫酶(GCDH)發生致病突變所致。GCDH是賴氨酸、羥賴氨酸和色氨酸降解通路中的關鍵酶，發生致病突變會導致該酶活性降低或缺失，賴氨酸、羥賴氨酸和色氨酸分解代謝受阻，造成戊二酸、3-羥基戊二酸等旁路代謝產物在體內異常蓄積，在中樞神經系統尤為明顯，可引起急性腦病危象，臨床主要表現為大頭畸形、進行性肌張力異常和運動障礙。

不同的GCDH基因的突變對GCDH活性及結構影響的程度不同。針對于本案中涉及到的兩個突變位點，發生在同一條或者不同的染色體上，對患者病情嚴重程度的影響是不同的。如果兩個突變發生在同一條染色體上，則不致病；兩個突變分別發生在不同的染色體上，則致病。為了評估疾病的嚴重程度，鑒定已知的不同的GCDH基因突變分布在同一條還是不同染色體上，對疾病的診斷具有決定性作用。現有的方法是提取DNA，構建載體，進行體外表達實驗，需要全套的分子生物學及微生物、細胞培養的實驗室，難度極大，且工作量大，耗時長，普通實驗室難以實施。

發明內容

本發明旨在克服現有技術的不足，提供一種鑒定GCDH基因同時含兩個突變位點位置的試劑盒及方法。

為了達到上述目的，本發明提供的技術方案為：

鑒定GCDH基因同時含兩個突變位點位置的試劑盒中含有如下引物對：

F1：CCTTCCCAGCCTCGCGTCCCGAGTTTGAGT(SEQ ID NO.1)

R1：GAAGCAGCCCAGGAGCTCCCCCAT(SEQ ID NO.2)

F2：CCTTCCCAGCCTCGCGTCCCGAGTTTGTCA(SEQ ID NO.3)

R2：GAAGCAGCCCAGGAGCTCCCCGTC(SEQ ID NO.4)；

所述兩個突變位點為：C.148TA、C.508AG突變位點。

優選地，引物對按如下排列組合使用：

①：F1+R1

②：F1+R2

③：F2+R1

④：F2+R2。

優選地，根據C.148TA、C.508AG突變分布情況，引物對按如下排列組合使用：

①：當待測樣本同時含C.148TA、C.508AG突變但分布在不同染色體上時：F1+R2或F2+R1；其中，F1和R1是檢測野生型的引物；

②當待測樣本同時含C.148TA、C.508AG突變且分布在同一條染色體上時：F2+R2。

基于上述試劑盒鑒定同時含C.148TA、C.508AG突變位點的方法是采用所述試劑盒中的引物對，在如下次序和條件下進行擴增檢測：

①：94℃，5min；