[發明專利]臍帶間充質干細胞對高氧暴露肺和腦損傷保護的動物模型

在審

• 申請號: 202010940706.1
• 申請日: 2020-09-09
• 公開（公告）號: CN112048479A
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 林益平;丁明星;姚靜嬋
• 申請（專利權）人: 金華職業技術學院
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N15/65;A01K67/027
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務所(普通合伙) 50230
• 代理人: 陳炳萍

1.一種慢病毒介導GFP標記UCMSc細胞系的建立方法，其特征在于，所述慢病毒介導GFP標記UCMSc細胞系的建立方法包括：

步驟一，利用慢病毒載體，構建GFP過表達病毒載體，得到滴度為1×10⁸TU/mL的病毒顆粒；

步驟二，從臍帶分離培養UCMSc，置于37°С、5％CO₂培養箱培養，流式細胞術鑒定。

2.一種由權利要求1所述慢病毒介導GFP標記UCMSc細胞系的建立方法建立的慢病毒介導GFP標記UCMSc細胞系。

3.一種由權利要求2所述慢病毒介導GFP標記UCMSc細胞系構建的高氧大鼠模型。

4.一種如權利要求3所述高氧大鼠模型的構建方法，其特征在于，所述高氧大鼠模型的構建方法包括：新生足月SD大鼠96只，生后6h之內隨機分為高氧組和空氣組各48只；將高氧組新生大鼠生后30min內置于自制氧箱中，持續輸入氧氣，維持氧箱氧濃度在95％以上，持續7天至結束處死取材；用氧濃度測定儀檢測氧濃度，鈉石灰吸收氧箱內CO₂，保持CO₂濃度小于5％，用變色硅膠吸除水蒸氣，保持濕度在50％-60％；每天定時開箱30min，添加水、飼料及更換墊料，并將高氧組和空氣組中的代母鼠互換；空氣組置于室內空氣中。

5.一種由權利要求2所述慢病毒介導GFP標記UCMSc細胞系構建的GFP-UC-MSc移植治療高氧大鼠模型。

6.一種如權利要求5所述GFP-UC-MSc移植治療高氧大鼠模型的構建方法，其特征在于，所述GFP-UC-MSc移植治療高氧大鼠模型的構建方法包括：

通過氣管局部注射GFP-UC-MSc移植，大鼠麻醉后，氣管內滴注GFP-UC-MSc混懸液0.1mL，對照組注射相應體積的PBS緩沖液；鼻腔注射干細胞移植，在左下腹部注射GFP-UC-MSc混懸液0.1mL，對照組注射相應體積的PBS緩沖液；尾靜脈注射進行干細胞移植，麻醉后大鼠通過尾靜脈注射分別注射相應細胞2×10⁶個，對照組尾靜脈注射相應體積的PBS緩沖液；最終96只大鼠按照干預分成8組，高氧組和空氣組各分為IT、IN、IV、PBS四組，每組12只；分別于干預后2d和8w各處死取材，行相應檢測。