[發明專利]一種用于檢測溶栓后腦出血31-kDa Occludin的試紙條及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 202010929144.0
• 申請日: 2020-09-07
• 公開（公告）號: CN112147323A
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 劉文蘭;徐跡;廖子君;雷雪萌;李夢娜;張圓
• 申請（專利權）人: 深圳市第二人民醫院
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 濰坊諾誠智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 37309
• 代理人: 李海英

本發明公開一種用于檢測溶栓后腦出血31?kDa Occludin的試紙條，所述試紙條由樣品墊、反應墊、硝酸纖維素膜和吸收墊依次貼在PVC底卡上制成，所述硝酸纖維素膜采用羊抗兔抗體劃線作為質控線C線，采用兔抗31?kDa Occludin蛋白的IgG捕獲抗體在硝酸纖維素膜上線作為檢測線T線，所述反應墊噴涂Fe₃O₄納米酶?抗31?kDa Occludin蛋白抗體偶聯復合物，所述反應墊采用含有1?2%的Casein?PBS和0.5%?1%Triton X?100進行預處理，所述試紙條特異性好，靈敏度高是一種價格低廉、準確性高、快速檢測、操作簡單的腦卒中溶栓或取栓后腦出血風險的預測產品，具有良好市場應用價值。

技術領域

本發明屬于免疫層析檢測領域，具體涉及腦卒中溶栓或取栓后腦出血的檢測，特別是一種腦卒中溶栓或取栓后腦出血蛋白片段及其應用。

背景技術

從1990年到2017年近20年來，腦卒中一直位列我國國民死亡原因首位。其高發病率、高致死率、高致殘率、高復發率、經濟負擔重五大特點，嚴重威脅人類健康。血管再通治療（溶栓或取栓）是目前腦卒中急性期治療的唯一有效手段，但存在腦出血的巨大風險，導致其治療率不足5%。如何明確溶栓或取栓導致腦出血的病因、早期識別風險預警標志、提供快速精確診斷成為困擾臨床醫生的棘手問題，是目前臨床亟需解決的重要問題。

再灌后腦出血的發生與腦缺血早期血腦屏障損傷密切相關，相關的分子機制研究層出不窮，積累了大量相關血清學標志物的數據。其中來源于凋亡血腦屏障內皮細胞的31-kDa Occludin蛋白降解片段，具有“血腦屏障損傷達到臨界點之前，一直維持低水平的正常血清基線；一旦血腦屏障損傷達到臨界點，血清水平驟然大幅升高”的生物學特性，具備作為理想血清標志物的重要特征。通過納米酶免疫層析抗原抗體反應對被測患者血清樣本進行31-kDa Occludin蛋白檢測，可實現血腦屏障損傷人群的快速識別，從而為腦卒中急性期治療后腦出血的發生，提供一種新型血清標志物及其檢測方法。

31-kDa Occludin蛋白降解片段，由于其分子量小、血清中含量低，對于其檢測的特異性和靈敏度有嚴格要求，傳統膠體金等免疫層析技術的檢測疾病受到巨大限制，而與此同時，從腦卒中發病到血管再通治療的時間窗僅有不到6小時，需要實現短時間的床旁檢測，基于蛋白質組學檢測難以擔當此任。2007年出現的納米酶技術，是一類既有納米材料的獨特性能，又有催化功能的模擬酶，已在多個領域得到了應用。在農藥殘留方面建立了以四氧化三鐵納米顆粒為核心的有機磷農藥檢測系統。在微生物方面利用納米酶的過氧化物酶樣活性，催化H₂O₂產生的強氧化性羥自由基能夠直接殺死病原微生物，破壞細菌膜。在醫學方面納米酶有保護心肌、改善阿爾茨海默病和缺血性腦卒中等功能。中國科學院生物物理研究所的閻錫蘊院士課題組在發現納米酶的基礎上，發展出了“納米酶試紙條”新技術，已成功應用于埃博拉、新布尼亞、流感病毒等的檢測。但是，現有技術中的這些納米酶并不具有普遍適用性，針對不同的靶標檢測，還需要尋找合適的納米酶，目前尚沒有出現適用于31-kDa Occludin蛋白降解片段的檢測納米酶檢測試紙條及相應的檢測方法。因此，開發一款價格低廉、準確性高、快速檢測、操作簡單的蛋白免疫層析產品，特別是對于腦卒中溶栓或取栓后腦出血風險的預測產品，具有重要意義。

發明內容

為了解決現有技術中的問題，發明人通過多次，反復的實驗和摸索，開發一款價格低廉、準確性高、快速檢測、操作簡單的腦卒中溶栓或取栓后腦出血風險的預測產品，該產品以31-kDa Occludin蛋白降解片段為檢測靶標，采用納米酶技術，具有特異性高，靈敏度好的特點。