[發(fā)明專利]一種采用細胞移植作為載體的生物膜材料

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010924259.0
• 申請日: 2020-09-04
• 公開（公告）號: CN111973808A
• 公開（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設計）人: 熊志軍;劉文;董欣
• 申請（專利權）人: 安徽惠恩生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/38;A61K35/545;A61K47/46
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 王依

1.一種采用細胞移植作為載體的生物膜材料，其特征在于，所述一種采用細胞移植作為載體的生物膜材料制備方法包括以下步驟：

S1：原材料準備：

1)足月順產人胎兒羊膜，

2)1％～8％濃度的氨水，

3)抗菌素，

4)平衡鹽液，

5)0.2％～0.4％濃度的胰酶溶液，

6)5％～15％濃度的PLLA溶液，

7)含血清5％～120％的DMEM培養(yǎng)液，

8)Co60放射源；

S2：選取無傳染病及系統(tǒng)性疾病的健康適齡產婦第一胎產后30min～120min內的胎盤；

S3：無菌條件下將羊膜自胎盤上鈍性分離；

S4：將羊膜置于平衡鹽溶液中，搖動振洗3次，每次5min，洗去血污及粘液，取出膜，置于平衡鹽溶液中，-10℃～-50℃凍存，備用；

S5：37℃恒溫搖床解凍；

S6：將解凍之膜置于1％～8％濃度的氨水中搖動振洗3次，每次10min；

S7：換用PBS溶液清洗直至無泡沫為止，此時膜呈潔白半透明狀；

S8：按需求將膜分切成不同規(guī)格(大小、形態(tài))，置于一次性凍存管中(加PBS抗菌素液)密封保存，登記規(guī)格、時間；

S9：Co60γ射線(6,000,000rads)照射滅菌，并降低抗原性；

S10：-10℃～-50％凍存?zhèn)溆茫?/p>

S11：依需求按登記規(guī)格取出，于37℃解凍；

S12：解凍后取出膜，置于0.2％～0.4％濃度的胰酶(1V)溶液中20cm2/2ml、37℃環(huán)境保持3小時，此時膜一面變?yōu)樘闋钅z樣物，一面仍韌而密實。以含5％～20％血清的DMEM培養(yǎng)液終止消化。用顯微外科鑷將兩層結構分開，棄去膠狀物，韌而密實地一層既是所要組織；

S13：用玻璃片撈取膜，將之去細胞面向上，平鋪于以培養(yǎng)液濕潤過的塑料培養(yǎng)皿底部，置于無菌操作臺中風干；

S14：表面涂布薄層5％～15％濃度的PLLA溶液，風干；

S15：生物膜制備完成，經紫外線照射2小時消毒后，即可用于接種胚胎干細胞。

2.根據(jù)權利要求2所述的一種采用細胞移植作為載體的生物膜材料，其特征在于，所述抗菌素包括：青霉素、克拉霉素、克林霉素。

3.根據(jù)權利要求2所述的一種采用細胞移植作為載體的生物膜材料，其特征在于，所述平衡鹽液為0.9％NACL溶液。