[發明專利]小黃魚生長激素生物反應器家蠶品系的構建方法

有效

• 申請號: 202010915249.0
• 申請日: 2020-09-03
• 公開（公告）號: CN112159819B
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 翁宏飚;牛寶龍;沈衛鋒
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/866;C12N15/66;A01K67/04
• 代理公司: 杭州浙科專利事務所(普通合伙) 33213
• 代理人: 沈淵琪

小黃魚生長激素生物反應器家蠶品系的構建方法，屬于家蠶轉基因遺傳育種技術領域。該方法包括：（1）合成小黃魚生長激素與轉鐵蛋白融合基因；（2）獲得piggBAC轉基因質粒pLX?Red?PcGH?TF；（3）轉基因質粒導入家蠶受精卵；（4）獲得G1代蠶卵；（5）篩選標記基因陽性個體；（6）驗證小黃魚生長激素在家蠶中高效表達；（7）鑒定遺傳穩定性；（8）建立小黃魚生長激素生物反應器家蠶品系。本發明一方面，高效低成本生產小黃魚生長激素，并可以進一步加工成小黃魚功能性添加劑，應用于小黃魚養殖。另一方面，緩解了蠶桑生產面臨的發展困境，提高蠶桑產業效益的效果。

技術領域

本發明屬于家蠶轉基因遺傳育種技術領域，具體涉及小黃魚生長激素生物反應器家蠶品系的構建方法。

背景技術

改革開放以來，在“以養為主”的發展方針指引下，水產養殖業發展取得巨大成就。水產養殖業的快速發展為解決城鄉居民“吃魚難”、保障優質動物蛋白的供給、降低天然水域水生生物資源的利用強度、促進漁業產業興旺和漁民生活富裕等都作出了突出貢獻。但是，與新時代的發展要求相比，水產養殖業還面臨著一些困難和問題。為促進水產養殖業綠色高質量發展，確保水產品質量安全，農業農村部會同其他有關部委聯合印發了《關于加快推進水產養殖業綠色發展的若干意見》，圍繞加強科學布局、轉變養殖方式、改善養殖環境、強化生產監管、拓寬發展空間、加強政策支持及落實保障措施等方面作出部署，要求強化投入品的管理。2019年中央一號文件更是將綠色投入品等領域自主創新列為需加快突破的農業關鍵核心技術之一。

生長激素(Growth hormone，GH)是包括魚類在內的所有脊椎動物腦下垂體分泌的糖蛋白類激素，具有促進魚體生長發育，加速蛋白質的合成，促進脂類降解，提高餌料效率等功能，在魚類育種和漁業生產中的應用一直受到研究者的關注。魚類生長激素基因的開發應用可概括為兩個方面：其一，采用轉基因方法，培育快速生長的轉基因魚；其二，應用基因工程技術，外源表達魚類生長激素，并通過有效途徑，使養殖魚類從體外獲取生長激素蛋白質，進而提高生長速度，提高飼料效率，從而降低養殖成本。

在我國，由于公眾對轉基因食品生物安全性和環境安全性的關注，雖然我國生長激素轉基因魚早已培育完成，但似乎離上市還是遙遙無期。在這種情況下，通過補充外源生長激素蛋白，來提高水產養殖效益，不失為一種切實可行的選擇。大量的研究表明，通過注射、埋植、浸泡或食道插管等途徑給藥生長激素，都可以促進魚類的生長，說明外源補充的生長激素與內源激素一樣具有生物活性。由于天然魚體中GH含量很低，提取工藝復雜，較難規模化生產，因此，通過基因工程技術生產重組生長激素，是獲得大量外源魚類生長激素最為經濟有效的方法。雖然外源激素在魚體內存在著半衰期短，需要連續添加等不足，但仍然顯示出作為魚飼料功能性添加劑，具有廣闊的前景。

外源蛋白表達系統中，大腸桿菌表達系統和酵母表達系統，由于不具備或僅有很低的蛋白質修飾功能，因而這兩種系統表達雖然具有易培養、操作簡單等優點，但表達的蛋白質因糖基化修飾不足，因而生物活性低，甚至無生物活性。另外，轉基因微生物的生物安全性也是值得關注的問題。