[發明專利]一種測定生物基質中青花椒堿濃度的方法

在審

• 申請號: 202010908722.2
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN112034063A
• 公開（公告）日: 2020-12-04
• 發明（設計）人: 冷明紅;葉雙雙;陸國才;夏玉葉;宗英;張海妮;丁玉芳
• 申請（專利權）人: 蘇州華測生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 王玉

本發明是一種測定生物基質中青花椒堿濃度的方法，基于液相色譜質譜法實現濃度測定。包括步驟：預制待測樣品、通過蛋白沉淀法對定量吸取的生物基質進行前處理，去除干擾青花椒堿含量測定的蛋白質；定量分析、將前處理后所得的待測樣品轉移至色譜柱，利用色譜柱分離青花椒堿和樣品中的干擾物質，最終進入質譜儀中進行分析，得到每毫升納克級的濃度結果。本發明是一種全新的測定生物基質中青花椒堿濃度的方法，在方法開發過程中，通過對比紫外檢測和質譜檢測兩種檢測手段，蛋白沉淀和液液萃取兩種提取方法，采用蛋白沉淀結合質譜檢測作為最終方法，使用本方法能將生物基質中青花椒堿定量測定的定量下限達到1.0納克/毫升級別，本方法相對于其它方法，既能保證足夠的靈敏度，又能有效控制實驗成本，步驟簡單明了，操作性強。

技術領域

本發明涉及一種青花椒堿的分析方法，尤其涉及一種高精度定量測量生物基質中青花椒堿濃度的方法。

背景技術

青花椒堿，第一個從花椒屬植物中發現的4-喹啉酮類生物堿。已有研究報道，青花椒堿具有抑菌作用，能很好的選擇性抑制革蘭氏陽性菌活性。這些獨特的生物學特性使其在醫藥、食品、化妝品和農業等方面具有廣闊的應用前景。有關青花椒堿研究的論文很多，對青花椒堿含量測定是其繼續深入研究的一個基本前提，靈敏快速的測定方法是研究的分析準確性與結果可靠性的保證并大大加快研究速度。目前青花椒堿在生物基質中的含量或濃度的分析方法還未見報道，開發出一種高效可靠的分析方法，對青花椒堿的后續研究有著巨大的幫助。

發明內容

本發明的目的旨在提出一種測定生物基質中青花椒堿濃度的方法，以此解決青花椒堿加速并深入研究的助益問題，該方法操作簡單快速，測量精確，靈敏度高。

本發明實現上述目的的技術解決方案是，一種測定生物基質中青花椒堿濃度的方法，包括：預制待測樣品，然后采用液相色譜-質譜法定量分析待測樣品中青花椒堿的濃度。

進一步地，該測定方法具體包括以下步驟：

通過蛋白沉淀法對定量吸取的生物基質進行前處理，去除干擾青花椒堿含量測定的蛋白質；

將前處理后所得的待測樣品轉移至色譜柱，利用色譜柱分離青花椒堿和樣品中的干擾物質，最終進入質譜儀中進行分析，得到每毫升納克級的濃度結果。

進一步地，所述前處理步驟為：先將生物基質轉移至處理容器，使用相對生物基質5倍樣品體積的乙腈渦旋混勻，并作離心處理，得到作為待測樣品的上清液和作為干擾物的底部沉淀物。

進一步地，所述離心處理的轉速為3200-4000轉/分鐘，離心時間為5-20分鐘。

進一步地，所述前處理步驟中在生物基質中加入50％樣品體積的內標甲醇溶液。

進一步地，所述液相色譜質譜法中第一流動相為含0.1％甲酸的滅菌注射用水，第二流動相為含0.1％甲酸的乙腈，且兩流動相由各自的泵驅動匯入色譜柱前的進樣器。

進一步地，定量分析中所用質譜儀的型號為ACQUITY UPLC I-Class+Xevo TQ-S。

進一步地，所述生物基質包括血漿、全血和組織勻漿液。

本發明所達到的有益效果：

(1)本方法采用簡單快速的蛋白沉淀進行前處理，去除干擾青花椒堿含量測定的蛋白質，并利用色譜柱分離青花椒堿和樣品中的干擾物質，使測量結果更精確。

(2)本發明是一種全新的測定生物基質中青花椒堿濃度的方法，使用本方法能將生物基質中青花椒堿定量測定的定量下限達到1納克/毫升級別，操作簡單快速，靈敏度高。

附圖說明

圖1是實施例1測定的生物基質中青花椒堿定量下線的質譜圖。