[發(fā)明專利]一種選育優(yōu)質(zhì)肉羊的分子生物學(xué)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010907186.4
• 申請日: 2020-09-02
• 公開（公告）號: CN111979338B
• 公開（公告）日: 2021-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉學(xué)峰;李旭業(yè);海龍;李信濤;王洪寶;張立春;姜明生;吳憲;王嘉厚;郭立宏;郝彩虹;呂雄杰;孫繼權(quán);杜軍;穆文利;王鋒;尤海洋;李莉;郭文凱;楊淑萍;劉麗秋;劉秀玲;王佳;王宇;董揚(yáng);張超
• 申請（專利權(quán)）人: 黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)分院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 遼寧共智律師事務(wù)所 21260
• 代理人: 張軍貴

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和分子育種領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明提供了杜泊羊PDK4基因上與肉質(zhì)性狀相關(guān)的SNP分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記的檢測方法以及該方法在提高羊肉肉質(zhì)以及優(yōu)質(zhì)肉羊品種培育中的應(yīng)用。所述分子標(biāo)記為PDK4基因外顯子4第95位的多態(tài)性位點(diǎn)，記作G95T。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知，分子標(biāo)記G95T與肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)，特別是肌內(nèi)脂肪含量、肌纖維直徑和失水率。因此，在培育肉羊的過程中可以通過該SNP分子標(biāo)記輔助選擇肉質(zhì)鮮嫩、多汁的GT型或TT型個體，從而加速優(yōu)質(zhì)肉羊育種進(jìn)程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)和分子育種領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明提供了杜泊羊PDK4基因與肉質(zhì)相關(guān)的SNP分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記的檢測方法以及該方法在提高羊肉肉質(zhì)水平及其在優(yōu)質(zhì)肉羊品種培育中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

肉質(zhì)相關(guān)性狀在肉羊育種中具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。肉的質(zhì)量受基因、飼喂、養(yǎng)殖條件等內(nèi)外因素影響。產(chǎn)肉性能主要包括屠宰率、酮體重、脂肪含量等指標(biāo)，肉的品質(zhì)又包括pH₂₄、熟肉率、失水率、剪切力、肉色、嫩度、肌纖維直徑等指標(biāo)。這些指標(biāo)能夠直接反應(yīng)肉的質(zhì)量。DNA分子標(biāo)記技術(shù)的迅猛發(fā)展，為人們在分子水平上研究肉質(zhì)相關(guān)性狀的遺傳機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。分子標(biāo)記輔助選擇被認(rèn)為是最具應(yīng)用前景的育種改良方法。由于分子標(biāo)記輔助選擇不易受環(huán)境因素的影響，且沒有性別、年齡的限制，可早期進(jìn)行選擇，因而能夠縮短世代間隔，提高選擇強(qiáng)度，進(jìn)而提高選擇效率和準(zhǔn)確性。

丙酮酸脫氫酶激酶4（Pyruvate Dehydrogenase Kinase，PDK4）是PDK/BCKDK蛋白激酶家族的成員，具有編碼組氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的線粒體蛋白，與動物骨骼肌的生長發(fā)育密切相關(guān)。其在糖代謝和脂肪酸代謝中也起重要作用，其通過抑制丙酮酸脫氫酶復(fù)合體的一個亞基的磷酸化促進(jìn)葡萄糖代謝過程的調(diào)節(jié)。在小鼠中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)采取饑餓處理后，鼠骨骼肌中PDK4基因mRNA的表達(dá)水平顯著提高。而對牛骨骼肌的相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，西澳大利亞牛骨骼肌中的PDK4表達(dá)水平高于威爾士牛，并且前者肌內(nèi)脂肪含量顯著高于后者，可見，PDK4表達(dá)量越高，肌內(nèi)脂肪含量越高。因而，以上現(xiàn)有技術(shù)表明PDK4基因與骨骼肌的生長發(fā)育和脂肪代謝相關(guān)，因而是研究羊肉質(zhì)相關(guān)分子標(biāo)記的潛在候選基因。

杜泊羊原產(chǎn)于南非，是由有角陶賽特羊和波斯黑頭羊雜交培育而成，是世界著名的肉用羊品種。杜泊羊以產(chǎn)肥羔肉特別見長，胴體肉質(zhì)細(xì)嫩、多汁、色鮮、瘦肉率高，被國際譽(yù)為“鉆石級肉”。杜泊羊能良好地適應(yīng)廣泛的氣候條件和放牧條件，在我國各地畜牧養(yǎng)殖場已經(jīng)廣泛引進(jìn)。目前，尚未有研究報(bào)道PDK4基因上存在與杜泊羊肉質(zhì)相關(guān)的分子標(biāo)記。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種羊肉質(zhì)相關(guān)分子標(biāo)記及其在品種培育中的應(yīng)用。具體地，本發(fā)明提供了杜泊羊PDK4基因與肉質(zhì)相關(guān)的SNP分子標(biāo)記，所述分子標(biāo)記的檢測方法以及該方法在提高羊肉肉質(zhì)水平以及優(yōu)質(zhì)肉羊品種培育中的應(yīng)用。

一方面，本發(fā)明提供了與羊肉質(zhì)性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，其對應(yīng)于PDK4基因的SNP位點(diǎn)；進(jìn)一步地，所述SNP位點(diǎn)具體為PDK4基因外顯子4第95位的多態(tài)性位點(diǎn)。進(jìn)一步地，所述分子標(biāo)記的SNP位點(diǎn)如SEQ ID NO:1所示，其中第95位核苷酸為G或T，記作G95T；

進(jìn)一步地，所述羊的種類為杜泊羊；

進(jìn)一步地，所述PDK4基因?yàn)镚enBank登錄號NC_040255.1所示；

另一方面，本發(fā)明提供了用于檢測羊肉質(zhì)性狀分子標(biāo)記G95T的引物，其含有如下所述的核苷酸序列：

上游引物F：5’-CATCAAAGTTCGAAACAGACACCA-3’（SEQ ID NO：2）；

下游引物R：5’-GCACAGCTTATATTCTCCAGCCA-3’（SEQ ID NO：3）

另一方面，本發(fā)明提供了包含所述羊肉質(zhì)性狀分子標(biāo)記的試劑盒，所述試劑盒包含如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的引物對；