[發明專利]一種單增李斯特菌的檢測方法

有效

• 申請號: 202010896650.4
• 申請日: 2020-08-31
• 公開（公告）號: CN112098389B
• 公開（公告）日: 2022-04-22
• 發明（設計）人: 孫大文;張翠云;黃倫杰;蒲洪彬;張道瑞
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;B82Y40/00;B82Y15/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 殷妹

1.一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）在振蕩條件下，向水中依次加入AgNO₃、Na₂CO₃和沒食子酸，常溫避光振蕩反應0.5～2.5小時，離心去除上清液，得到納米銀籠基底，所得納米銀籠基底重新分散于水中；

（2）將培養至對數期的單增李斯特菌用水配制成濃度為0～10⁸ CFU/mL的單增李斯特菌標準樣品液，取相同體積各濃度的單增李斯特菌標準樣品液與步驟（1）的納米銀籠基底混合均勻，孵化后，用毛細管檢測的方法進行拉曼檢測，以單增李斯特菌濃度為橫坐標，拉曼信號強度為縱坐標，建立標準曲線；

各濃度的單增李斯特菌標準樣品液中加入納米銀籠基底的質量相同；

（3）將實際待測樣品與步驟（1）的納米銀籠基底混合均勻，孵化后，用毛細管檢測的方法進行拉曼檢測，所得拉曼信號強度與步驟（2）標準曲線進行對比，即可得出實際待測樣品中單增李斯特菌的含量；

步驟（1）所述AgNO₃、Na₂CO₃和沒食子酸的比例為（0.4～0.65）mg：（2.5～7.5）μmol：（2～4）μmol；

所述納米銀籠基底不僅為空心，且具有開口。

2.根據權利要求1所述一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，步驟（2）和（3）所述納米銀籠基底均以水分散液的形式加入到單增李斯特菌標準樣品液和實際待測樣品中，納米銀籠基底水分散液的質量濃度為0.04～0.15mg/mL，納米銀籠基底水分散液與步驟（2）中單增李斯特菌標準樣品液或步驟（3）中實際待測樣品的體積比均為1：1。

3.根據權利要求1所述一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，步驟（1）所述AgNO₃在水中的質量濃度為0.005～0.013%。

4.根據權利要求1所述一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，步驟（1）所述AgNO₃、Na₂CO₃和沒食子酸加入的時間間隔均為3～8秒。

5.根據權利要求1所述一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，步驟（2）和（3）所述孵化的時間為2～3分鐘。

6.根據權利要求1所述一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，步驟（2）所述濃度為0～10⁸ CFU/mL的單增李斯特菌標準樣品液的濃度梯度為10² CFU/mL。

7.根據權利要求6所述一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，步驟（2）所述單增李斯特菌標準樣品液的濃度分別為0、10²、10⁴、10⁶和10⁸ CFU/mL；其中0為空白對照。

8.根據權利要求1所述一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，步驟（1）所述AgNO₃以AgNO₃水溶液的形式加入，其水溶液的質量濃度為0.5～2%；所述Na₂CO₃以Na₂CO₃水溶液的形式加入，其水溶液的濃度為0.1～1 mol/L；所述沒食子酸以沒食子酸水溶液的形式加入，其水溶液的濃度為0.05～0.5 mol/L。

9.根據權利要求1所述一種單增李斯特菌的檢測方法，其特征在于，步驟（1）中，向5～8mL的水中依次加入40～65μL質量濃度為1 %的AgNO₃水溶液、5～15μL濃度為0.5 mol/L的Na₂CO₃水溶液和20～40μL濃度為0.1 mol/L沒食子酸水溶液；

步驟（2）所述對數期的單增李斯特菌由以下方法培養得到：單增李斯特菌純菌種進行劃線培養，培養12～15 h后，用接種環取單菌落分散于液體培養基中，培養至對數期。