[發明專利]一種皮膚再生修復細胞組合物及制備方法

有效

• 申請號: 202010881284.5
• 申請日: 2020-08-27
• 公開（公告）號: CN111956668B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 王陽;楊洋
• 申請（專利權）人: 李錫沅
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K38/18;A61K47/36;A61P17/00;A61P17/02;A61K8/99;A61Q19/00;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 北京華仁聯合知識產權代理有限公司 11588
• 代理人: 周明新

本發明涉及一種皮膚再生修復細胞組合物及制備方法。本發明制備的轉基因miR?126脂肪干細胞，其中所述miR的高表達能夠促進脂肪干細胞向皮膚細胞的分化。將所述的轉基因miR?126脂肪干細胞制備成為皮膚損傷修復劑之后，通過驗證證明了其具有較顯著的促進傷口愈合效果，因此可用于消炎，皮膚再生或傷口愈合。

技術領域

本發明涉及生物領域，具體的涉及一種皮膚再生修復細胞組合物及制備方法。

背景技術

生物體的組織、器官中存在一定數量的干細胞。以維持其再生或者參與損傷后的組織修復干細胞是一類具有多向分化潛能和自我更新特點的增殖速度緩慢的原始細胞，可以廣泛運用于醫學發展的各個領域，皮膚損傷的治療、組織再生及年輕化就是其中的一個部分。嚴重燒傷患者常應用同種異體皮膚移植。然而這種移植一般僅能起到暫時覆蓋創面的作用近30年。許多患者得益于通過細胞培養而得到的細胞治療產品通過自體表皮角質細胞的培養。大量嚴重燒傷患者得到了有效治療。

已有的研究證實，多能干細胞可分化為表皮細胞和真皮細胞。多種組織工程皮膚產品已獲得美國FDA批準，Green等通過體外培養患者的角質細胞并將這些細胞產品應用于大面積燒傷患者，可以預防感染和脫水。另外，利用同種異體細胞進行臨時表皮細胞替代的治療方法還可以運用于其他皮膚疾病的治療。特別是某些皮膚潰瘍性疾病和某些遺傳性皮膚病傷口治愈可能并不需要移植組織的永久保存。事實上，無論是生物性的無細胞基層。或者甚至是包含有纖維、膠原蛋白和透明質酸等生物性物質的基層等。在對其進行自體移植的時候。都會和同種異體的角質細胞移植時出現相同的情況。及逐漸排斥除了對創面的臨時覆蓋作用。還可以刺激細胞的內生性增殖和創面周圍正常組織中的干細胞向創面聚集。

目前。皮膚再生醫學方面還包括基因治療相關內容。如以Ⅶ型膠原基因轉染治療惡性營養障礙性表皮水皰癥等創傷愈合過程中，生長因子調控著損傷后皮膚再生的全過程，包括細胞趨化、增殖、基質合成與降解、炎癥反應等多個方面。因此，在以往的臨床實踐中，常采用堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、表皮生長因子(EGF)和角朊細胞生長因子(KGF)等促有絲分裂的生長因子以加速創面愈合和改善創面修復。然而，上述生長因子的外用效果十分有限，可能與生長因子的半衰期短暫、活性作用和生物利用度較低或需要攜帶其他(蛋白)分子等因素有關。基因治療的優點是可以克服生長因子外用的種種不足能夠通過局部活細胞主動和長期的表達來實現。目前，角朊細胞進行基因轉染的技術較為成熟，但隨著角朊細胞的不斷分化，移植物在活體最終以“痂皮”的形式脫落。因此，除干細胞外，將基因導入其他成體細胞尚無法取得良好的治療效果。

隨著組織工程技術研究的深入,應用組織工程皮膚修復皮膚缺損是目前皮膚缺損修復研究的熱點之一,脂肪組織來源干細胞(adiposetissue2derivedstem cells,ADSC),由于來源廣泛,取材方便,具有多向分化潛能[,在皮膚的創面微環境下有向血管內皮細胞和表皮細胞分化的可能,是皮膚組織工程種子細胞的理想來源。2001年，Zuk等第一次在脂肪組織中找到間充質干細胞，稱為脂肪源性干細胞(Adipose-derivedstemcells，ADSCs)，是一種具有多項分化潛能的干細胞，近年來成為干細胞中的“明星”細胞，成為各種損傷修復研究的重點。

目前，雖然已經有研究將脂肪干細胞用于皮膚損傷的治療，但是其使用時干細胞轉化為皮膚細胞的效率還不高，活性還不好，還有待于進一步的提高。

發明內容

本發明克服了現有技術的缺陷，提供了一種能夠將來源廣泛的脂肪干細胞高效的轉化為皮膚細胞的方法。

發明人在研究脂肪干細胞分化皮膚的過程中，發現了miR-126和miR34a在脂肪干細胞向皮膚細胞分化時是高表達的存在，初步推定該所述miR的高表達能夠促進脂肪干細胞向皮膚細胞的分化，并且在對分化的細胞進行蛋白鑒定時發現二個miR均能夠上調RUNX2蛋白的表達，而RUNX2蛋白本身也是促進脂肪干細胞向表皮分化的重要蛋白，因此，初步鑒定miR-126和miR34a通過一系列的細胞調控來正向影響RUNX2的表達進而促進了脂肪干細胞向皮膚細胞的分化。