[發明專利]EB病毒陰性的NK-92細胞及其制備方法有效
| 申請號： | 202010872058.0 | 申請日： | 2020-08-26 |
| 公開（公告）號： | CN111926016B | 公開（公告）日： | 2022-12-09 |
| 發明（設計）人： | 栗鳳鵬;曹青;李華順 | 申請（專利權）人： | 阿思科力（蘇州）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N9/20;C12N15/85;C12N5/10 |
| 代理公司： | 蘇州三英知識產權代理有限公司 32412 | 代理人： | 朱如松 |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | eb 病毒 陰性 nk 92 細胞 及其 制備 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種EB病毒陰性的NK-92細胞，其特征在于，由以下制備方法制備得到：
1)設計用于EB敲除的兩個sgRNA，再將其擴增得到用于EB病毒敲除的sgRNA，所述sgRNA用于敲除EB中的OriP區域；
所述兩個sgRNA分別為sgRNA1和sgRNA2，所述sgRNA1的序列如SEQ ID NO:1所示；所述sgRNA2的序列如SEQ ID NO:2所示；
2)將所述用于EB病毒敲除的sgRNA和Cas9配合使用，形成用于阻斷EB病毒復制的RNP復合物，即用于EB病毒敲除的系統；
3)再將所述RNP復合物轉入NK-92細胞中，再通過流式分選篩獲得EB陰性的NK-92細胞。
2.根據權利要求1所述的EB病毒陰性的NK-92細胞，其特征在于，在步驟2)中，所述系統還包括質粒載體，所述Cas9設在所述載體上。
3.根據權利要求1所述的EB病毒陰性的NK-92細胞，其特征在于，在步驟2)中，所述Cas9的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述系統為CRISPR-Cas9系統。
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