[發明專利]一種裂谷熱病毒人源單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 202010860411.3
• 申請日: 2019-02-15
• 公開（公告）號: CN111978400B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 嚴景華;王奇慧;馬桐;楊化冰;高福;馬素芳
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/13;C12N15/866;C12N5/10;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發明公開了一種裂谷熱病毒人源單克隆抗體及其應用，屬于醫藥技術領域。本發明以桿狀病毒表達的RVFV糖蛋白Gn和Gc作為抗原，從一例裂谷熱康復患者的PBMCs中篩選到可以結合RVFV糖蛋白Gn和Gc的記憶B細胞，且通過單一B細胞測序、體外中和以及體內保護等實驗，鑒定出8株高效中和RVFV感染的Gn人源單克隆抗體以及一株Gc人源單克隆抗體。本發明的人源單克隆抗體具有非常高的體外中和活性(IC₅₀可低至1.93±0.6pM，達到pM級)，可以有效治療被RVFV感染的小鼠，預防RVFV對小鼠的感染，具有極高的臨床治療和預防RVFV感染的應用價值。

技術領域

本發明涉及一種裂谷熱病毒人源單克隆抗體及其應用，屬于醫藥技術領域。

背景技術

裂谷熱病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)是嚴重威脅人類和動物健康的蟲媒病毒之一，屬于布尼亞病毒目(Bunyavirale)白細病毒科(Phenuiviridae)白蛉病毒屬(Phlebovirus)，可引起人畜共患病裂谷熱(Rift Valley fever，RVF)，致牲畜死亡和流產。其表面覆有囊膜及糖蛋白突起，由3段負鏈RNA構成病毒基因組(S、M和L)，其中，M片段編碼表面糖蛋白Gn和Gc，且在Gn的5’端編碼非結構蛋白(NSm)，而Gn和Gc是病毒的主要囊膜蛋白，是病毒進行入侵和膜融合的關鍵蛋白；其傳播范圍十分廣，綿羊、山羊、牛、水牛、駱駝等家畜均可感染該病毒；其致死率十分高，尤其是年幼的動物，一旦感染，病死率接近100％。

人也會感染RVFV，且多數癥狀輕微，可自愈，但是，也有部分患者出現重癥，其中，5-10％的患者的視網膜會產生退行性病變，重者可導致單眼或雙眼永久性失明；1％的患者會出現出血熱，其中，50％的患者會死亡；1％的患者會出現腦炎，出現此癥狀的患者雖死亡率不高，但通常會留下嚴重的后遺癥，如偏癱等。

就時間上來說，1930年，科學家Danbney等在肯尼亞大裂谷的一次綿羊疾病暴發調查中首次分離到RVFV，自此，人們發現RVF疫情會在動物和人類中定期暴發，造成重大損失。例如，1977-1978年，RVF疫情在埃及暴發，當時共計有20萬人感染，其中包括18,000例重癥患者及600例死亡病例；而自2000年到2018年6月，全球共向世界衛生組織(WHO)通報了4830例重癥RVF病例，其中包括967例死亡病例，死亡率約為20.0％。

就地域上來說，通常，RVFV在非洲地區流行。但是，2000年9月，阿拉伯半島(沙特阿拉伯和也門)也暴發了RVF疫情，這也是首個非洲以外地區報道該疫情；2016年，我國也出現一例輸入病例，該患者從安哥拉返回中國。

就傳播方式上來說，RVFV主要通過蚊蟲叮咬傳播。已知的可傳播本病的蚊子種類多達30種，分布在北極以外的其它各個大陸，因此，RVFV繼續向世界擴散的風險非常高。

目前，針對動物的RVFV感染的有效預防手段是疫苗。在獸用疫苗方面，肯尼亞和南非使用RVFV的減毒活疫苗，埃及和南非使用福爾馬林滅活疫苗。通常，減毒活疫苗僅在綿羊免疫中有效，不能保護牛，且副作用較高，經常引起母羊流產；福爾馬林滅活疫苗雖具有更高的安全性，但存在成本高、免疫不持久的問題。而其它種類疫苗仍在研究階段，包括：DNA疫苗、基因工程改造株、VLPs等。

針對人群的RVFV感染的有效預防手段主要仍是通過免疫家畜、切斷傳染源。此外，非洲地區的高危人群可接種福爾馬林滅活疫苗，但是由于成本問題，不可能大范圍接種。人患病后，病毒唑(ribavirin)可能會有治療效果，但目前臨床數據不多。

因此，亟需研究出有效的RVFV感染治療藥物，尤其是可治愈重癥患者的治療。在這方面，抗體顯示出巨大潛力。

發明內容

為解決上述問題，本發明對RVFV疫苗進行了研究，發現單獨的Gn或是Gn與Gc一起的疫苗形式可有效產生RVFV的中和抗體，也就是說，針對Gn或Gc的抗體極有可能中和RVFV的感染，成為治療RVFV感染的藥物。