[發明專利]抗GCC的核酸、其制備方法、具有該核酸的免疫細胞及其應用

有效

• 申請號: 202010845599.4
• 申請日: 2020-08-20
• 公開（公告）號: CN112795584B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 劉明錄;王立新;盧永燦;馬洪華;王亮;劉敏;韓國英;馮建海
• 申請（專利權）人: 山東省成體細胞產業技術研究院有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/10;C12N5/10;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 山東華君知識產權代理有限公司 37300
• 代理人: 張儉偉

抗GCC的核酸、其制備方法、具有該核酸的免疫細胞及其應用，抗GCC的核酸，其至少包含Leader核苷酸序列、GCC單鏈抗體核酸人工序列、CD8的鉸鏈區核苷酸序列、跨膜?刺激結構域核苷酸序列、CD3ζ信號傳導區核苷酸序列、自裂解肽T2A核苷酸序列、趨化因子IL7核苷酸序列及趨化因子CCL19核苷酸序列。本發明能夠提高免疫細胞的針對性，減少對非腫瘤細胞的傷害，提高有效性、安全性。

技術領域

本發明涉及基因技術領域，尤其涉及一種抗GCC的核酸、其制備方法、具有該核酸的免疫細胞及其應用。

背景技術

結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，占全球所有腫瘤的10％，在全世界惡性腫瘤的發病率中占第3位。手術雖為有效的治療方法，但仍有近1/3的結直腸癌患者在術后出現復發和遠處轉移，5年生存率不足50％。目前，相關研究也表明結直腸發病具有逐年上升和年輕化趨勢，嚴重影響危害人類健康。因此，早期發現、早期治療是提高結直腸癌療效、改善預后和提高生存率的關鍵。

在惡性腫瘤治療方法中，使用手術、放化療和靶向治療的治愈率以及預后都很差，對患者造成極大的傷害，而嵌合抗原受體T細胞(chimeric antigen receptor T cells，CAR-T)過繼性免疫治療策略克服了以上治療方法的缺點，給癌癥治愈帶來了希望。CAR-T治療的原理如下：通過基因工程修飾技術，使體外分離收集的癌癥患者的T細胞表達識別腫瘤特異性抗原的嵌合抗原受體 (CAR)，并在體外大量擴增CAR-T細胞后將其輸回癌癥患者體內，達到清除腫瘤的目的。相關研究表明CAR-T細胞療法在急性淋巴細胞白血病(ALL)和淋巴瘤等惡性腫瘤治療中取得了良好效果，因此，CAR-T技術具有較大的應用前景。

因此，開發一種抗GCC的核酸、其制備方法、具有該核酸的免疫細胞及其應用，不但具有迫切的研究價值，也具有良好的經濟效益和工業應用潛力，這正是本發明得以完成的動力所在和基礎。

發明內容

為了克服上述所指出的現有技術的缺陷，本發明人對此進行了深入研究，在付出了大量創造性勞動后，從而完成了本發明。

具體而言，本發明所要解決的技術問題是：提供抗GCC的核酸、其制備方法、具有該核酸的免疫細胞及其應用，以提高免疫細胞的針對性，減少對非腫瘤細胞的傷害，提高有效性、安全性。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

第一方面，本發明提供了抗GCC的核酸，其至少包含Leader核苷酸序列、 GCC單鏈抗體核酸人工序列、CD8的鉸鏈區核苷酸序列、跨膜-刺激結構域核苷酸序列、CD3ζ信號傳導區核苷酸序列、自裂解肽T2A核苷酸序列、趨化因子 IL7核苷酸序列及趨化因子CCL19核苷酸序列。

本發明中，作為一種優選的技術方案，所述跨膜-刺激結構域核苷酸序列選自CD8、CD27、CD28、CD137(即4-1BB)、CD134(即OX40)、ICOS分子的全部或部分DNA片段。

本發明中，作為一種優選的技術方案，所述抗GCC的核酸，其包括依序排列的

如SEQ ID NO.2所述的Leader核苷酸序列；

如SEQ ID NO.3所述的GCC單鏈抗體核酸人工序列；

如SEQ ID NO.4所述的CD8的鉸鏈區核苷酸序列；

跨膜-刺激結構域核苷酸序列；

如SEQ ID NO.6所述的4-1BB胞內區核酸序列；

如SEQ ID NO.7所述的CD3ζ信號傳導區核苷酸序列；

如SEQ ID NO.8所述的自裂解肽T2A核酸人工序列；

如SEQ ID NO.9所述的趨化因子IL7核苷酸序列；