[發(fā)明專利]快速篩選新冠病毒RBD特異性全人源中和性單克隆抗體方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010839232.1
• 申請(qǐng)日: 2020-08-19
• 公開（公告）號(hào): CN111925439A
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金艾順;韓曉建;王應(yīng)明;胡超;李婷婷;王建為;李勝龍;申美瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶醫(yī)科大學(xué);馮玉林
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C12N15/13;C12N15/85
• 代理公司: 重慶中流知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50214
• 代理人: 胡長(zhǎng)生

1.快速篩選新冠病毒RBD特異性全人源中和性單克隆抗體方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1-S3、采集新冠肺炎康復(fù)患者的外周血，分選RBD特異性記憶B細(xì)胞，再通過RBD特異性記憶B細(xì)胞的mRNA獲得抗體可變區(qū)cDNA；

S4、構(gòu)建抗體可變區(qū)基因表達(dá)盒；

S5、將S4得到的抗體可變區(qū)基因表達(dá)盒轉(zhuǎn)導(dǎo)入細(xì)胞表達(dá)抗體并收集上清，篩選RBD特異性單克隆抗體；

S6、將S5得到的RBD特異性抗體上清，檢測(cè)阻斷假病毒感染細(xì)胞活性，同時(shí)檢測(cè)上清阻斷RBD與ACE2結(jié)合能力，雙重方法檢測(cè)單克隆抗體中和能力，篩選RBD特異性中和性單克隆抗體。

2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速篩選新冠病毒RBD特異性全人源中和性單克隆抗體方法，其特征在于，S2、首先采用去死細(xì)胞染料（Dead Dye）去除S1得到的PBMC的死細(xì)胞，然后采用CD19、mIgG、mIgD和S-RBD對(duì)PBMC中活的RBD特異性并且結(jié)合能力高的記憶B細(xì)胞染色標(biāo)記，篩選出針對(duì)RBD特異性記憶B細(xì)胞；S3、采用RT-PCR擴(kuò)增獲得抗體可變區(qū)cDNA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速篩選新冠病毒RBD特異性全人源中和性單克隆抗體方法，其特征在于，S5中，將S4得到的抗體可變區(qū)基因表達(dá)盒轉(zhuǎn)導(dǎo)入哺乳細(xì)胞中48小時(shí)表達(dá)抗體并收集上清，使用384孔板包被RBD，檢測(cè)上清，篩選RBD特異性單克隆抗體。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的快速篩選新冠病毒RBD特異性全人源中和性單克隆抗體方法，其特征在于，S4中，采用巢式PCR擴(kuò)增S1-S3得到的抗體可變區(qū)cDNA，然后構(gòu)建抗體可變區(qū)基因表達(dá)盒。