[發明專利]用于胰島培養的組合培養基及其制備方法有效
| 申請號： | 202010819023.0 | 申請日： | 2020-08-14 |
| 公開（公告）號： | CN112063577B | 公開（公告）日： | 2023-05-16 |
| 發明（設計）人： | 張佳林;楊召銘;郭庭維;林建貞;李峰;張城碩 | 申請（專利權）人： | 中國醫科大學附屬第一醫院 |
| 主分類號： | C12N5/071 | 分類號： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京華清迪源知識產權代理有限公司 11577 | 代理人： | 杜立軍 |
| 地址： | 110001 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 胰島 培養 組合 培養基 及其 制備 方法 | ||
1.一種組合培養基用于培養人胰島的培養的方法，其特征在于，所述方法為，將胰島接種于培養基中，置于37℃、5%CO2?的細胞培養箱中培養，即得人胰島；
所述培養基包括以下原料制成：CMRL1066培養基、BSA?以及羊膜提取物；
所述羊膜提取物蛋白的質量濃度為0.1-1.0mg/mL；
所述培養基的制備方法為：向所述?CMRL1066培養基中添加BSA?和羊膜提取物，混合均勻，得到所述組合培養基；
所述羊膜提取物的添加方法為：用含青霉素和鏈霉素的PBS溶液清洗羊膜，將清洗后的羊膜切碎研磨成羊膜顆粒，將所述羊膜顆粒加入到CMRL1066基礎培養基中，4℃超聲勻漿，將超聲勻漿物離心，取上清液，將所述上清液過濾后，得到濾液，再向所述濾液中添加BSA后，得到所述組合培養基。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，
所述BSA的質量百分數為0.625%?。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，
所述超聲勻漿過程中，勻漿機轉速為10000?rpm，超聲勻漿溫度為4℃，超聲勻漿時間為1h。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，
所述離心為梯度離心，先4000?g離心10min后，提取上清液，將所述上清液再15000?g離心5?min后，再提取上清液，離心溫度為4℃。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，
所述青霉素的濃度為1000?IU/ml，所述鏈霉素的濃度為0.1mg/ml。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，
所述羊膜提取物與所述CMRL1066培養基的質量體積比為1:2。
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