[發明專利]一種格氏乳桿菌LG-G12高密度發酵及提高菌粉質量的方法

在審

• 申請號: 202010816658.5
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN112063547A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 陳齊;鄭建豐;馬章獻;韓迪;宋錦安
• 申請（專利權）人: 潤盈生物工程（上海）有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/225
• 代理公司: 上海專益專利代理事務所(特殊普通合伙) 31381
• 代理人: 方燕娜;王雯婷

本發明涉及微生物技術領域，具體的講是一種格氏乳桿菌LG?G12高密度發酵及提高菌粉質量的方法，按照如下步驟進行：在MRSA培養基接種格氏乳桿菌LG?G12，再轉接2%至另一個MRSA培養基中得到格氏乳桿菌LG?G12種子液；在發酵培養基中接種2%種子液，配制另一發酵培養基，以2~3％的接種量接入格氏乳桿菌LG?G12種子液，pH值降到4.4左右時，停止發酵，取樣離心，得到菌泥；按照菌泥：保護劑為1：2的比例進行乳化及真空冷凍干燥，得到格氏乳桿菌LG?G12凍干菌粉。與現有技術相比，格氏乳桿菌LG?G12發酵液活菌數高且無雜質沉淀，凍干粉得率比現有水平高一倍，凍干粉的活菌數有明顯提高，菌粉存活率及穩定性好，比現有生產水平有顯著提高。

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體的講是一種格氏乳桿菌LG-G12高密度發酵及提高菌粉質量的方法。

背景技術

格氏乳桿菌（Lactobacillus gasseri）是益生菌中常見的一種 ,其廣泛存在于人和動物的胃腸道中。格氏乳桿菌屬于革蘭氏染色陽性桿菌，乳桿菌屬，不具觸酶、氧化酶及運動性，在好氧及厭氧環境均能生長，屬于兼性異質發酸性菌株，葡糖代謝時不產生氣體，形態呈球形或卵圓形，無芽孢，無莢膜。能在pH值為4 .0~5 .0甚至更低的酸性環境中生長，最適生長溫度為35℃~38℃，發酵產物L-（+）-乳酸為主。

格氏乳桿菌是健康新生兒消化道中分離純化得到，屬人體原生菌種，其能夠在胃液中存在并分泌乳酸、乙酸等促進胃部的消化能力；另外，格氏乳桿菌能夠調整腸道菌群平衡，抑制腸道不良微生物的增殖，對腸道致病菌產生拮抗作用。作為益生菌，格氏乳桿菌同樣具有增強機體免疫力，促進營養吸收提高造血功能，排出腸內毒素并延緩老化，抗過敏等功能。由于益生菌無殘留，不產生耐藥性等優點，目前，己普遍應用于動物詞料生產中，人們普遍認為是有前途的抗生素的替代品。而影響格氏乳桿菌菌粉質量的因素包括菌粉活菌數高低、菌粉穩定性及在胃腸液的存活率，而菌粉活菌數則是由格氏乳桿菌的發酵及凍干過程的存活率所決定的。

因此設計一種可以實現格氏乳桿菌高密度發酵和提高菌粉質量的方法是十分有必要的。

發明內容

本發明突破了現有技術的難題，設計了一種格氏乳桿菌LG-G12高密度發酵及提高菌粉質量的方法。

為了達到上述目的，本發明設計了一種格氏乳桿菌LG-G12高密度發酵及提高菌粉質量的方法，按照如下步驟進行：

步驟1：將蝦粉及DB7801分別用水浸泡，浸泡2小時后，105℃條件下沸騰30分鐘，于6000rpm，8min離心，取上清液待用；

步驟2：配制MRSA培養基；

步驟3：在250mL平底瓶中裝200mL MRSA培養基，接種保存的格氏乳桿菌 LG-G12甘油管，后置于37℃恒溫培養箱中靜置培養12小時，再轉接2%至另一個新鮮的200mL MRSA培養基中，后置于37℃恒溫培養箱中靜置培養6至8小時，得到格氏乳桿菌 LG-G12種子液；

步驟4：利用步驟1完成的上清液及蝦粉，配制發酵培養基；

步驟5：在250mL平底瓶中裝200mL發酵培養基，接種2%步驟3所得的格氏乳桿菌LG-G12種子液，置于37℃恒溫培養箱中靜置培養12小時，檢測OD₆₀₀、pH及發酵液活菌數；

步驟6：根據步驟5的檢測數據優化培養基配方：配制另一發酵培養基放入發酵罐中進行發酵培養，在另一發酵培養基的基礎上，添加5g/L的碳酸鈣，培養基裝量為4L，起始培養基pH為7.2，滅菌消毒條件為溫度121℃、時間25分鐘，降溫至36~38℃，以2~3％的接種量接入格氏乳桿菌 LG-G12種子液，保持溫度37℃，攪拌轉速80rpm，并且通入氮氣維持發酵罐壓力在0.03MPa，期間檢測發酵液在600nm波長處的吸光值及pH值，待pH值不下降或降到4.4左右時，停止發酵，取樣離心，得到菌泥；