[發明專利]AuNPs1-2 pH探針在男性不育癥中的應用和產品

在審

• 申請號: 202010815683.1
• 申請日: 2020-08-14
• 公開（公告）號: CN112014367A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 吳思嫻;栗曉亮;于抗抗;許文明;余孝其;李坤
• 申請（專利權）人: 四川大學華西第二醫院
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N21/80
• 代理公司: 成都天嘉專利事務所(普通合伙) 51211
• 代理人: 趙麗

本發明公開了AuNPs1?2 pH探針在男性不育癥中的應用和產品，屬于生物技術和臨床醫學檢測技術領域。將AuNPs1?2 pH探針應用制備檢測男性不育癥的產品中，其中，產品包括用于檢測精子內pH值的試劑，利用AuNPs1?2 pH探針監測男性精子內亞細胞局部pH變化及外界刺激下的pH變化，為臨床原因不明不育癥男性患者提供診斷參考及臨床咨詢，也將輔助尋找不育癥男性患者的病因及發病機制。

技術領域

本發明涉及pH探針在男性不育癥中的應用和產品，尤其涉及將AuNPs1-2 pH探針應用于定性檢測男性不育癥及對應產品，屬于生物技術和臨床醫學檢測技術領域。

背景技術

多年來，對男性精液的常規分析，一直用于作為判斷男性生育力的基本臨床指標。而目前臨床上對絕大部分的不育癥男性患者的真正不育原因仍不清楚，尤其是臨床上大約有三分之一不育癥男性患者的常規精液分析結果均正常或者接近正常，臨床上把這類患者歸為“不明原因不育癥”患者，因此，長期以來，臨床對男性不育癥的檢測判斷存在極大的困難。

現有技術“CN200510078423.6 一種用于男性不育癥檢測方法的檢測試劑”中公開：制備五乙酰氧基葡萄糖苷，采用所得的五乙酰氧基葡萄糖苷制備2-氯-4-硝基苯基-α-四乙酰氧基葡萄糖苷，采用所得的2-氯-4-硝基苯基-α-四乙酰氧基葡萄糖苷制備2-氯-4-硝基苯基-α-D-葡萄糖苷；該檢測試劑用于男性不育癥，特別是生精障礙與輸精障礙不育癥鑒別的檢測方法中，以適應儀器自動化分析。

現有技術“CN201711284133.6 EMC10蛋白作為生物標志物在診斷男性不育中的應用”中公開：提高EMC10蛋白活性和/或表達量的物質可以預防男性不育、治療男性不育、促進精子和卵子受精、促進精子和去透明帶的卵子受精、提高精子與胞膜融合的能力、治療精子功能障礙、促進精子的成熟、促進精子在附睪中的成熟、提高精子的運動能力、提高精子獲能相關的蛋白酪氨酸磷酸化水平、促進精子的獲能、提高精子的頂體反應能力、修復精子異常形態、恢復鈉/鉀APT酶的活性、維持精子內離子平衡、維持精子內Na+平衡、維持精子內HCO3平衡、維持精子內pH值平衡、提高男性生育能力。

現有技術“CN201610147268.7 一種精子質量評估的試劑盒及其使用方法”中公開：試劑盒包括不含酶活抑制劑的細胞裂解液、檢測緩沖液1、蛋白酶抑制劑cocktail、試劑A液、試劑B液、牛血清白蛋白、熒光試劑、唾液酸酶標準原液和檢測緩沖液2；檢測緩沖液1為磷酸緩沖液或者BWW培養液；試劑A液為：1％BCA二鈉鹽，2％無水碳酸鈉，0.16%酒石酸鈉，0.4％氫氧化鈉，0.95％碳酸氫鈉，混合調pH值至11.2-11.3；試劑B液為：4％硫酸銅；檢測緩沖液2為含0.05mmol/l乙酸鈉和0.25μg/μl牛血清白蛋白的磷酸緩沖液。通過精子中唾液酸酶活性的檢測，為臨床原因不明的男性不育患者提供診斷依據及臨床咨詢。

發明內容

發明人在長期的研究中發現，不育癥男性患者的精子內pH值較正常男性的精子內pH值小，且不育癥男性患者的精子為酸性，再結合AuNPs1-2 pH探針分子結構在不同pH環境下發生共軛體系的改變，從而產生不同強度、不同種類的熒光，即pH值越小，紅色熒光強度越大；pH值越大，綠色熒光強度越大，其中，AuNPs 1-2 pH探針在pH4.5-8.0的范圍內產生較明顯的變色效果，而不育癥男性患者的精子內pH值和正常男性精子內pH值均在該范圍內，基于此，應用酸性環境中的AuNPs1-2 pH探針分子中熒光共軛體系為紅色熒光，并以正常男性精子內pH值為檢測指標，可明顯觀察到不育癥男性患者精子內pH值對應的紅色熒光強度更顯著。

針對于現有技術的不足，以及臨床實際需求，本發明提供AuNPs1-2 pH探針在男性不育癥中的應用和產品，其中，利用AuNPs1-2 pH探針（納米級pH探針）監測男性精子內亞細胞局部pH變化及外界刺激下的pH變化，為臨床不明原因不育癥男性患者提供診斷參考及臨床咨詢，也將輔助尋找不育癥男性患者的病因及發病機制。

為了實現上述技術目的，提出如下的技術方案：