[發(fā)明專利]一種家蠶血液型膿病的智能檢測系統(tǒng)及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010813793.4
• 申請日: 2020-08-13
• 公開（公告）號: CN111999317A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設計）人: 孫運朋;任曉曉;楊萬軍;卿卓;羅朝斌
• 申請（專利權）人: 貴州省蠶業(yè)研究所(貴州省辣椒研究所)
• 主分類號: G01N23/00
• 分類號: G01N23/00;G01N1/28
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

1.一種家蠶血液型膿病的智能檢測方法，其特征在于，所述家蠶血液型膿病的智能檢測方法包括：

步驟一，剪去蠶的尾角或腹足，制作血液樣本，對蠶的尾角或腹足進行研磨，滴入相應的溶液，再進行精細研磨檢測樣品；

步驟二，將制作完成的檢測樣品放置在專門的溫度調(diào)節(jié)保溫箱內(nèi)部，分成3份，一份作為檢測樣品，另兩份作為備用樣品；

步驟三，利用電子顯微鏡獲取檢測樣品的樣品圖像，并對所獲取的檢測樣品圖像進行處理；

步驟四，將一份備用樣品加入少量磷酸緩沖液過濾，濾液使用差速離心法反復離心至乳白色，收集沉淀，用少量的PBS懸浮靜置；

步驟五，溶于適量TE中，加入等體積堿解液，37℃堿解4h；10％HAc調(diào)pH值至7～8；加SDS和蛋白酶K至終濃度分別為0.5％100μg/mL，37℃水浴3h；

步驟六，加1/10體積的3mol/L醋酸鈉溶液；加3倍體的冰乙醇沉淀DNA，漂洗、風干后的基因組DNA溶于TE，貯存?zhèn)溆茫?/p>

步驟七，在不同濃度的反應組分和不同反應時間條件下，在實時濁度儀中進行LAMP反應，每隔6s測定1次濁度值，根據(jù)濁度值繪制濁度變化曲線，當濁度值大于0.25即可判為陽性；

步驟八，根據(jù)家蠶血液型膿病試驗獲取的圖像樣本對檢測樣品圖像進行識別，對檢測輸出的樣品結(jié)果進行輸出，若檢測血液樣本出現(xiàn)六角形，大小均勻，折光性較強，則判定為家蠶血液型膿病；

步驟九，通過利用揚聲器，用以對結(jié)果和實驗操作過程，進行提示播音；通過顯示器，顯示出檢測過程中有關的數(shù)據(jù)；

步驟十，通過數(shù)據(jù)儲存模塊對圖像進行分類存儲，并通過信號傳輸模塊與云服務器連接，實現(xiàn)數(shù)據(jù)的傳輸、下載和共享。

2.如權利要求1所述的家蠶血液型膿病的智能檢測方法，其特征在于，步驟一中，精細研磨采用的具體方法為：

將粗磨完成的家蠶血液型膿病檢測樣品放置在研磨槽中，將研磨棒垂直放置；

手持中間位置，順時針研磨三圈，逆時針研磨三圈，不斷重復操作；

在研磨過程中，不斷對研磨的檢測樣品進行觀察。

3.如權利要求1所述的家蠶血液型膿病的智能檢測方法，其特征在于，步驟三中，對所獲取的檢測樣品圖像進行處理的具體過程為：

獲取相應的樣品圖像檢測去噪訓練樣本，確定樣品圖像中的圓形鄰域；

計算圓形鄰域樣品圖像的灰度值，并對灰度值進行排序，取其中間值作為中心像素灰度的新值；

通過圓形鄰域?qū)φw圖像進行平滑處理。

4.如權利要求1所述的家蠶血液型膿病的智能檢測方法，其特征在于，步驟六中，冰乙醇沉淀DNA時為-20℃沉淀，過夜；然后利用預冷的75％乙醇漂洗2次，風干后的基因組DNA溶于TE，-20℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

5.如權利要求1所述的家蠶血液型膿病的智能檢測方法，其特征在于，步驟七中，不同濃度的反應組分為2～12mmol/L MgSO4、0.2～1.2mol/L Betaine和0.6～1.6mmol/LdNTPs；

不同反應時間為20min、40min、60min和80min。

6.如權利要求1所述的家蠶血液型膿病的智能檢測方法，其特征在于，所述數(shù)據(jù)儲存模塊對圖像進行分類存儲的方法為：

根據(jù)獲取的家蠶血液型膿病檢測樣品圖像，提取相應的特征；

構(gòu)建K-NN算法模型中鄰元素作為家蠶血液型膿病檢測樣品圖像解析參數(shù)，讀取每個圖像的特征，并將放入數(shù)組；

讀取每一圖像中的特征，對圖像進行分類，對圖像進行類別標簽和圖像序號。

7.如權利要求6所述的家蠶血液型膿病的智能檢測方法，其特征在于，所述根據(jù)獲取的家蠶血液型膿病檢測樣品圖像，提取相應的特征，所采用的圖像特征提取過程為：

確定家蠶血液型膿病檢測樣品圖像中的檢測區(qū)域，計算檢測區(qū)域中的像素；

根據(jù)像素的數(shù)據(jù)，對像素進行排序，選取中間像素，并對周圍的像素進行替換；

計算檢測區(qū)域中的直方圖，對該直方圖進行歸一化處理；

將得到的每個cell的統(tǒng)計直方圖進行連接成為一個特征向量，整幅圖的LBP紋理特征向量。